[发明专利]一种桐花鱼的分子鉴定方法

摘要

本发明涉及分子生物检测领域，公开了一种桐花鱼的分子鉴定方法，包括以下步骤：鱼体DNA的提取、PCR扩增、酶切及电泳检测鉴定，通过上述四个步骤即可准确的鉴定测试鱼是否为桐花鱼。本发明操作简单，成本低廉，省时准确，对仪器设备要求低。且本方法取鱼鳞进行分子鉴定，最大程度上降低了对鱼体尤其是活体亲鱼的损伤，便于推广应用，能满足桐花鱼养殖业主、政府监管部门对桐花鱼亲鱼、上市桐花鱼产品的鉴定需求。

主权项

1.桐花鱼的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：A.鱼鳞 DNA的提取：在鱼体尾部或腹部取鲜活鱼鳞4‑6片，置于1.5毫升灭菌离心管中，加入30‑50微升裂解液，将鳞片浸没于裂解液中，在65摄氏度静置2小时，移至95摄氏度静置20分钟，取1‑3微升上清用于PCR扩增；B.PCR扩增：进行PCR扩增；PCR反应体系包括1‑3微升含100纳克DNA的DNA模板，3微升10×buffer，2.4微升脱氧核糖核苷三磷酸，1微升正引物，1微升反引物，0.3微升Taq聚合酶，无菌水补足至30微升；C.酶切：取10微升PCR产物，加入2微升10×buffer，2微升XbaI，用无菌水补足至20微升，置于37摄氏度3～5小时；D.电泳检测与鉴定：取5微升酶切产物与1微升6×loading buffer混合，在2％的琼脂糖凝胶上点样，120V条件下电泳15分钟，用凝胶成像系统拍照分析电泳结果，根据电泳条带判定该鱼是否桐花鱼；步骤B中，正向引物序列为5’‑GAGACCTGTATGAATGGCTAA‑3’，反向引物序列为5’‑ACTCAGATCACGTAGGACTT‑3’，扩增产物为478bp。