[发明专利]5’端不受碱基限制的gRNA的制备方法在审
申请号: | 201510421000.3 | 申请日: | 2015-07-16 |
公开(公告)号: | CN105039309A | 公开(公告)日: | 2015-11-11 |
发明(设计)人: | 秦伟;林硕;李松 | 申请(专利权)人: | 深圳市盛捷生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 生启 |
地址: | 518000 广东省深圳市宝安*** | 国省代码: | 广东;44 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明公开了一种5’端不受碱基限制的gRNA的制备方法,包括如下步骤:提供Csy4蛋白;将所述Csy4蛋白特异性识别的识别序列插入到gRNA对应的DNA序列的N20位点之前得到第一序列,在启动子后插入用于提高转录效率的增益序列得到第二序列,通过搭桥PCR的方法将所述第一序列与所述第二序列连接得到pre-gRNA转录模板,接着利用转录试剂盒进行体外转录得到pre-gRNA;以及将所述Csy4蛋白与所述pre-gRNA加入到反应液中,充分反应后提纯,提纯得到的gRNA即为所需的gRNA。这种gRNA的制备方法可以快速的、高效的在体外制备gRNA,经过试验验证,制得的gRNA的5’端不受碱基限制,并且该gRNA在整体动物模型上有效。 | ||
搜索关键词: | 不受 碱基 限制 grna 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种5’端不受碱基限制的gRNA的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:提供Csy4蛋白;将所述Csy4蛋白特异性识别的识别序列插入到gRNA对应的DNA序列的N20位点之前得到第一序列,在启动子后插入用于提高转录效率的增益序列得到第二序列,通过搭桥PCR的方法将所述第一序列与所述第二序列连接得到pre‑gRNA转录模板,接着利用转录试剂盒进行体外转录得到pre‑gRNA;以及将所述Csy4蛋白与所述pre‑gRNA加入到反应液中,充分反应后提纯,提纯得到的gRNA即为所需的gRNA。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳市盛捷生物技术有限公司,未经深圳市盛捷生物技术有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201510421000.3/,转载请声明来源钻瓜专利网。