[发明专利]一种高含量γ‑氨基丁酸茶叶提取物的制备方法

摘要

本发明涉及一种高含量γ‑氨基丁酸茶叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤A、摘取茶树上的绿茶嫩芽，消毒后接种于MS培养基，诱导出茶叶愈伤组织；B、制备高产γ‑氨基丁酸茶叶干细胞培养液；C、选取步骤A所得乳白色的茶叶愈伤组织作为种子，装入高产γ‑氨基丁酸茶叶干细胞培养液中悬浮培养，得茶叶干细胞固体粉末；D、将步骤C获得的茶叶干细胞固体粉进行破壁匀浆处理；D、将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比12混合，过滤，冷冻结晶，分理出柱型结晶，得高含量γ‑氨基丁酸茶叶提取物。本发明具有所得γ‑氨基丁酸茶叶提取物得率高，γ‑氨基丁酸茶叶提取物中γ‑氨基丁酸的含量高的优点。

主权项

一种高含量γ‑氨基丁酸茶叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：A、摘取茶树上的绿茶嫩芽，经过体积分数70%的乙醇消毒，在无菌条件下用剪刀将绿茶嫩芽切成2‑5mm长的小段，接种于MS培养基，控制室温在25±1℃，暗培养7天，诱导出乳白色、土黄色、浅绿色三种不同颜色的茶叶愈伤组织；B、制备高产γ‑氨基丁酸茶叶干细胞培养液：按质量比称取50‑80% MS培养基、10‑40%植物凝胶、3.8‑7.5% NAA、3.5‑7.2%蔗糖、0.01‑0.3%吲哚乙酸、0.01‑0.3%6‑苄氨基腺嘌呤、0.01‑0.1%二氢茉莉酮酸甲酯，在玻璃容器中混合加热至75‑78℃，搅拌到完全溶解后冷却到室温，加入适量HEPES缓冲液，调节溶液的pH至6.3‑6.7；C、选取步骤A所得乳白色的茶叶愈伤组织作为种子，按接种量为质量比5%的比例,装入含250mL高产γ‑氨基丁酸茶叶干细胞培养液的500mL培养瓶中悬浮培养，摇床转速控制在120rpm，培养温度控制在25±1℃，光照控制在1500勒克斯，每天光照8小时，培养12天得到乳白色团簇即茶叶干细胞，收获乳白色团簇并冷冻干燥得茶叶干细胞固体粉末；D、将步骤C获得的茶叶干细胞固体粉末用去离子水冲洗干净，按质量比1:1将茶叶干细胞固体粉末与甘油混合搅拌均匀，使用高压均质机在25000PSI条件下进行破壁匀浆处理；E、将步骤D获得的细胞破壁匀浆混合物和无水乙醇按质量比1:2混合，依次通过5微米聚丙烯过滤器、医用活性炭过滤器、0.45微米聚丙烯过滤膜进行过滤，获得清液在‑10℃冰箱中静置24小时，下层得无色透明柱型结晶，用分液漏斗分出下层柱型结晶，用无水酒精淋洗干净后真空干燥，得高含量γ‑氨基丁酸茶叶提取物。