[发明专利]一种抑制NEMA从头DNA合成现象的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201510426641.8 | 申请日： | 2015-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN105018616B | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 许文涛;黄昆仑;王晨光;翟百强;罗云波;朱鹏宇;徐瑗聪 | 申请（专利权）人： | 北京福德安科技有限公司;中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100083 北京市海淀区天秀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种抑制切克内切酶介导等温扩增(NEMA)从头DNA合成现象的方法及相应试剂盒。所述方法为，在试剂盒中使用合适的切克内切酶，增大切克内切酶和dNTP的使用量，添加甜菜碱和海藻糖等辅助因子，从而达到在保证有效扩增的前提下抑制从头DNA合成导致结果无法判定现象。本方法相应试剂盒含有上述反应试剂。本方法实现NEMA扩增结果的有效判定，消除从头DNA合成对反应产生的抑制作用，提高了等温扩增技术的可信度。且操作简单，成本低廉，可用于等温扩增检测手段中。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 nema 从头 dna 合成 现象 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一项抑制切克内切酶介导等温扩增从头DNA合成现象的方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：(1)添加Nt.BstNBI切克内切酶和dNTP，特别添加海藻糖、甜菜碱在原有反应体系中，其中，Nt.BstNBI的添加范围为6‑8U/25μL；dNTP的添加范围为0.3mM‑0.5mM；海藻糖和甜菜碱的添加范围分别为50‑70mM和0.8‑1.2M；(2)扩增反应温度58‑60℃，反应时间40min‑1h；(3)通过凝胶电泳判断抑制效果。
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