[发明专利]一株高效转化L-天冬氨酸生产L-天冬酰胺的工程菌及其应用

摘要

本发明涉及一株用于生产l‑天冬酰胺的基因工程菌CICC 11034S，宿主为大肠埃希氏菌BL21(DE3)（Escherichia coli BL21(DE3)），含有来源于大肠埃希氏菌JM109（Escherichia coli JM109）的l‑天冬酰胺合成酶基因的表达载体。利用构建的工程菌全细胞高密度催化，可以高效转化l‑天冬氨酸生产l‑天冬酰胺，转化率为95.8%，l‑天冬酰胺产量可达126.5 g/L，生产速率为15.81 g/(L·h)，底物廉价，生产过程简便，副产物少，有效降低生产成本，具有很好的应用价值和可观的经济效益。

主权项

1.一株生产L‑天冬酰胺的基因工程菌株E. coli BL21(DE3)/pET28a‑asnA CICC 11034S，其特征在于，所述基因工程菌的制备方法包括以下步骤：1）利用大肠埃希氏菌（Escherichia coli）JM109的基因组DNA为模板，以携带EcoRI酶切位点的AsnAU：5’‑GCC GAA TTC ATG AAA ACC GCT TAC‑3’，和携带Hind III酶切位点的AsnAD：5’‑GTT AAGCTT TTA CAG CAG AGA AGG GAC‑3’为引物扩增L‑天冬氨酸合成酶基因asnA；2）用EcoRI/HindIII酶切处理asnA基因，将asnA基因插入到pET28a(+)载体上的EcoRI和HindIII酶切位点之间，得重组载体；以及3）将重组载体转化宿主E. coli BL21(DE3)，得基因工程菌株E. coli BL21(DE3)/pET28a‑asnA CICC 11034S。