[发明专利]一种预示和鉴定绵羊超数排卵性状的分子标记方法及其分子标记引物

摘要

一种预示和鉴定绵羊超数排卵性状的分子标记方法及其分子标记引物，它公开了一种分子标记方法。本发明是利用绵羊FSHR基因5＇调控区c.‑365的C>T突变(C‑365T)突变位点设计，分子标记引物为FSHRPF和FSHRPR。方法为一、用引物扩增绵羊FSHR基因5＇调控区段；二、使用Sau3AI对PCR扩增片段内C‑365T突变位点进行酶切检测；三、进行基因型判定；四、构造线性模型进行关联分析；BB基因型供体在超数排卵过程中具有更高的排卵数，拥有更高的超数排卵效率。本发明操作简单，检测费用低，精确度高，适合于自动化检测。本发明利用FSHR基因5＇调控区段的基因型信息与绵羊超数排卵性状的关联性。

主权项

一种预示和鉴定绵羊超数排卵性状的分子标记方法，其特征在于该分子标记方法是利用绵羊FSHR基因5＇调控区c.‑365的C>T突变位点进行分型，从而预示和鉴定绵羊超数排卵性状；预示和鉴定绵羊超数排卵性状是按照以下步骤进行的：一、以提取的绵羊基因组DNA为模板，采用FSHRPF和FSHRPR引物，进行PCR扩增，收集PCR产物；取PCR产物进行凝胶电泳检测，并采用Sau3AI限制性内切酶对PCR产物进行酶切，获得酶切产物；二、使用浓度为3％的琼脂糖凝胶对酶切产物进行分离，然后根据电泳分离结果进行基因型判定；判定的标准为：①电泳后呈现单一条带，大小为138bp，则绵羊FSHR基因5＇调控区段‑365位点未突变，碱基为C，PCR扩增产物不能够被限制性内切酶Sau3AI酶切，将其命名为AA基因型；②电泳后呈现两条带，大小分别为138bp和26bp，则绵羊FSHR基因5＇调控区段‑365位点发生突变，碱基为T，PCR扩增产物能够被限制性内切酶Sau3AI完全酶切，将其命名为BB基因型；③电泳后呈现三条带，大小分别为138bp，112bp和26bp，则绵羊FSHR基因5＇调控区段‑365位点处于杂合状态，碱基为C和T，PCR扩增产物只能够被限制性内切酶Sau3AI部分酶切，将其命名为AB基因型；三、构造以下线性模型：Y＝μ+G+L+H+e；其中：Y代表相关性状的记录值；μ代表群体的平均值；G代表基因型固定效应；L代表品种固定效应；H代表场年季固定效应；e代表随机残差效应；然后利用SAS 6.12软件包将基因型固定效应与超数排卵状进行关联分析，并估计性状的最小二乘均值，关联分析结果表明，对于卵巢上排卵点数量，各基因型群体间为BB＞AB＞AA；BB型群体绵羊胚胎受精率和优良胚胎率的均值高于AA型和AB型群体；在移植妊娠率方面，以AB型群体均值最高；四、依据基因型将绵羊供体分为三种类型，选择BB基因型绵羊供体参与超数排卵处理，从而实现对绵羊超数排卵数的分子标记辅助选择，即完成预示和鉴定绵羊超数排卵性状的分子标记方法；所述的FSHRPF的序列如序列表Seq ID No：1所示，FSHRPR的序列如序列表Seq ID No：2所示。