[发明专利]一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法

摘要

本发明提供一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，属于生物技术领域。本发明通过Trizol溶液裂解植物细胞，利用硅基质膜吸附柱去除掉mRNA后用玻璃纤维滤膜吸附柱特异性吸附Micro RNA。同时利用去蛋白液和漂洗液洗去杂质。常规的植物MicroRNA提取方法主要是通过从凝胶中切下Micro RNA片段，对其进行提取与纯化，耗时需要20h以上，同时长时间的操作容易造成Micro RNA的降解，与常规的植物MicroRNA提取方法相比，本方法仅需要1h左右即可以提取到植物micro RNA，可以节省大量的提取时间。

主权项

一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，包括植物组织的破碎、MicroRNA的吸附以及杂质的去除，其特征是：植物组织的破碎：称取0.2‑1g植物样品加入液氮研磨成粉状，将其迅速转入1.5ml离心管，加入0.5‑1ml Trizol裂解液，振荡器震荡30‑60s后，加入100‑300ul的Buffer A，振荡器震荡30‑60s；MicroRNA的吸附以及杂质的去除：将样品10000‑13000rpm/min离心10min，离心后将上清吸到1.5ml离心管，加入等体积的Buffer B，混匀后将样品加到RNase‑free吸附柱 RA，10000 ‑13000rpm/min离心1min，收集液体到新的1.5ml离心管，加入等体积的Buffer C混匀后将样品加到RNase‑free吸附柱 RB；倒掉液体，加入200‑600ul去蛋白液，10000‑13000rpm/min离心1‑5min；倒掉液体，加入200‑600ul 漂洗液，2000‑12000rpm/min离心1‑5min；倒掉液体，加入200‑600ul 漂洗液，10000‑13000rpm/min离心1‑5min；倒掉液体，吹干后加入30‑60ul DEPC水，10000‑13000 rpm/min离心1‑5min，收集液体。