[发明专利]一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法

摘要

本发明提供一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，所述方法包括：1)、成熟培养；2)、精卵共同孵育；3)、收集分裂胚胎；4)、吸取琼脂糖清洗过的受精卵后，待琼脂糖凝固，将琼脂糖小块放入已经含OPU-IVF分裂胚的微滴内；5)、将含有琼脂糖包埋的卵巢受精卵转入含粒细胞单层的胚胎培养液微滴中即可。本发明采用琼脂糖包埋屠宰场卵巢获得的IVF分裂胚胎与OPU-IVF分裂胚胎一起培养，即能够发挥胚胎培养的群体优势，又保证了OPU胚胎不被混淆、系谱清晰，提高了OPU-IVF胚胎的生产效率。

主权项

一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)、将屠宰场卵巢收集的或每头次活体采卵(OPU)获得的卵丘卵母细胞复合体(COCs)置于体外成熟(IVM)液中，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养22‑24h；2)、将冻精解冻后在爬高液内培养30min，取上清液离心5min，然后用体外受精(IVF)液离心洗涤一次，再加入到含卵母细胞的IVF液滴中，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下精卵共同孵育22‑24h；3)、吹打去除经IVF的COCs周围颗粒细胞，而后将受精卵转入胚胎培养液内，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养24h左右，收集分裂胚胎；4)、将1％琼脂糖凝胶60℃水浴加热溶解，而后放入39℃培养箱备用；用时将溶解后的琼脂糖在塑料培养皿上作4个100μL微滴，置于配备热台(温度调至39℃)的体视显微镜下，转入屠宰场卵巢‑IVF分裂胚，清洗2‑3次；将巴氏管前端用酒精灯拉细至管口直径略大于受精卵(约为200μm)，吸取琼脂糖清洗过的分裂胚后，待琼脂糖凝固，将琼脂糖小块放入已经含OPU‑IVF分裂胚的微滴内；5)、若微滴内OPU‑IVF分裂胚不足10枚，用琼脂糖小块包埋的屠宰场卵巢‑IVF分裂胚补足10枚，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养，6‑8天后记录囊胚率。