[发明专利]嗜血杆菌菌种保存方法

摘要

一种嗜血杆菌菌种保存方法，通过嗜血杆菌保存液制作、嗜血杆菌菌种保存、取用的步骤来保存嗜血杆菌菌种。本发明有益的效果是采用本发明保存的嗜血杆菌菌种生长良好，生化性状稳定，药敏特性符合CLSI的要求，保存时间长，操作简便，成本低，省时省力，解决目前嗜血杆菌保存操作繁琐、费时费力，并且嗜血杆菌存活期限短的问题，保存效果好，满足嗜血杆菌菌种保存的需求，利于推广。

主权项

一种嗜血杆菌菌种保存方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养基制作，选取100ml甘油和100ml蒸馏水混合均匀制作成初级培养基，然后将初级培养基置入灭菌器中进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间为15min，待灭菌器压力表的压力降到零后，立即取出初级培养基，此时，初级培养基的温度为95℃，然后在初级培养基中持续缓慢加入无菌脱纤维羊血25ml，获得甘油羊血巧克力汤，待甘油羊血巧克力汤冷却至室温后，分装到10ml无菌试管中，每支试管装5ml甘油羊血巧克力汤，获得巧克力培养基；(2)嗜血杆菌菌种保存，取嗜血杆菌标准菌株接入巧克力培养基，然后在CO2环境、35℃温度中过夜培养，然后采用一支5ml甘油巧克力汤扩大培养制备成浓菌液，再分装到0.5ml的无菌试管中，接着立即置入到‑35℃温度的冰箱中进行保存；(3)取用，取用时，将0.5ml的无菌试管从冰箱中取出，然后置于35℃的培养箱中复溶5min，然后立即转移到巧克力培养基上，置于CO2环境、35℃温度中过夜培养。