[发明专利]一种基于RMCE技术的转基因方法在审
| 申请号： | 201510459245.5 | 申请日： | 2015-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN105063087A | 公开（公告）日： | 2015-11-18 |
| 发明（设计）人： | 郑敦武;黎妃凤;王正龙;苏翠;俞晓峰 | 申请（专利权）人： | 赛业（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳 |
| 地址： | 215400 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于RMCE技术的转基因方法，包括以下步骤：以Rosa26载体为框架，Lox2272位点或Attp70位点等构建载体；载体测序正确后，电转到ES细胞中，用含有抗生素的培养基进行筛选，获得阳性ES细胞；PCR或Southern Blot再次验证；将带有Flp重组酶的质粒转到阳性ES细胞中，获得阳性ES细胞；将验证正确的阳性ES细胞显微注射到小鼠的囊胚中，而后转移至代孕母鼠中，获得含有荧光标记的RMCE工具鼠。本发明是由RMCE与重组酶技术融合而来，其既有RMCE技术的优点，又能实现基因的定点插入，试验周期短、效率高、同时也减少了基因的随机插入带来的毒性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 rmce 技术 转基因 方法 | ||
【主权项】：
一种基于RMCE技术的转基因方法，其特征在于，包括以下步骤：构建载体：以Rosa26载体为框架，加上Lox2272位点或Attp70位点、广谱性启动子、荧光蛋白基因、LoxP位点或Attp70位点、Frt位点、筛选标记和DTA终止区域；载体测序正确后，电转到ES细胞中，用含有抗生素的培养基进行筛选，获得阳性ES细胞；PCR或Southern Blot再次验证；将带有Flp重组酶的质粒转到阳性ES细胞中，获得没有筛选标记的阳性ES细胞；将验证正确的阳性ES细胞显微注射到小鼠的囊胚中，而后转移至代孕母鼠中，获得含有荧光标记的RMCE工具鼠。
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