[发明专利]一种新的农杆菌介导的大白菜原位转基因方法

摘要

本发明公开了一种新的农杆菌介导的大白菜原位转基因方法,大白菜生长至开花始期，去除已开的花，保留花蕾，用镊子轻轻将花蕾剥开小口，将花序全部浸泡在含待转基因的农杆菌浸染液里2～4min，正常管理，采收种子，进行转化后代的抗性鉴定和分子检测，获得转基因阳性植株。针对大白菜难分化的特点，本发明不需外植体的再生系统，简化和缩短转基因过程，直接得到转化种子，无须进行繁琐的组织培养，免除从离体原生质到再生植株漫长的人工培养过程，操作简便、快速、高效、成本低、易于掌握，这对组织培养时再生困难的大白菜基因型的转基因研究具有较大的应用价值，在其他作物涉及植株再生的转基因方法遇到困难时，亦具有很好的应用前景。

主权项

一种新的农杆菌介导的大白菜原位转基因方法，其特征在于：（1）配制农杆菌浸染液：挑取含有待转基因的单菌落，接种到含筛选抗生素的YEB液体培养基中，培养至OD₆₀₀=0.6～0.8；取菌液稀释到无抗生素的YEB液体培养基中，培养至OD₆₀₀=0.6～0.8时，离心处理，沉淀物用液体MS培养基将菌体重悬；（2）大白菜原位转基因方法：大白菜于田间正常生长至开花始期，去除已开的花，保留花蕾，用镊子轻轻将花蕾剥开小口，将花序全部浸泡在上述农杆菌浸染液里2～4min；正常管理，采收种子；（3）大白菜转化后代的抗性鉴定：将收获的大白菜种子播种于含抗生素的培养基MS+1mg/LBA上，挑选具有抗性的幼苗进行转化植株的分子检测；（4）大白菜转化植株的分子检测：采集具有抗性的大白菜幼嫩叶片，用常规的CTAB法提取叶片DNA进行PCR检测；取PCR反应产物，用1%的琼脂糖凝胶进行电泳，如有待转基因的条带，则说明是转基因阳性植株，转化成功。