[发明专利]一种玉米秸秆发酵制备L-苹果酸以及米根霉菌突变株-2的选育方法在审

专利信息
申请号: 201510474784.6 申请日: 2015-08-05
公开(公告)号: CN105018537A 公开(公告)日: 2015-11-04
发明(设计)人: 李兴江;孙婷;杨英;王海涛;吴学凤;刘亚;李顺;姜绍通;潘丽军 申请(专利权)人: 合肥工业大学
主分类号: C12P7/46 分类号: C12P7/46;C12N1/14;C12N15/01;C12R1/845
代理公司: 安徽省合肥新安专利代理有限责任公司 34101 代理人: 吴启运
地址: 230009 安*** 国省代码: 安徽;34
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摘要: 一种玉米秸秆发酵制备L-苹果酸的方法,是以玉米秸秆酸水解液作为培养基的基材,也作为碳源,同时添加氮源、无机盐和中和剂作为液体培养基,灭菌后接种米根霉菌突变株-2于发酵罐中进行有氧发酵,固液分离后发酵液用碱性离子交换树脂D301吸附分离,水洗脱得L-苹果酸水溶液,米根霉菌突变株-2是以(Rhizopus oryzae)CICC41160为出发的菌株,通过同位素60Co诱变孢子并结合丙烯醇和氟乙酸平板筛选得到突变菌株。本方法以玉米秸秆计,L-苹果酸的产量达3%,仅次于葡萄糖,与初始菌株发酵相比,L-苹果酸的产量提高了51.76%,杂质富马酸、琥珀酸的含量分别降低了90.12%和81.34%。
搜索关键词: 一种 玉米 秸秆 发酵 制备 苹果酸 以及 霉菌 突变 选育 方法
【主权项】:
一种玉米秸秆发酵制备L‑苹果酸的方法,包括液体培养基的配制、灭菌、接种、发酵培养和分离,其特征在于:所述的液体培养基是以玉米秸秆水解液作为培养基的基材,浓度85‑115g/L,同时添加硫酸铵3.5~4.5g/L、硫酸镁0.25~0.35g/L、硫酸亚铁0.020~0.030g/L、磷酸二氢钾0.45~0.55g/L、硫酸锌0.05~0.15g/L、碳酸钙70~90g/L;培养基灭菌后接种米根霉菌突变株‑2,孢子浓度106~107CFU/min,接种量8~12vt%;所述的发酵培养是在发酵罐中于31~33℃、通气量0.35~0.45L/L.min条件下搅拌发酵70~75小时;所述的玉米秸秆水解液是过40目筛的玉米秸秆粉加入1~2倍量的水于球磨机中湿球磨1~2小时,然后转入水解釜中再加5~6倍量的水,并用硫酸溶液调pH值2~3,于110~130℃搅拌水解1~1.5小时;水解结束后用氨水调pH值4.5~5.5,固液分离后浓缩至浓度85~115g/L;所述的米根霉菌突变株‑2是利用同位素60Co对出发菌株Rhizopus oryzae CICC41160进行诱变,诱变剂量10~30Gy,辐照时间为20min;辐射后用丙烯醇浓度6ml/L平板筛选得突变株‑1,将突变株‑1再次60Co辐照后接种于氟乙酸质量浓度为7g/L的平板上筛选得突变株‑2。
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