[发明专利]用于快速检测阪崎肠杆菌的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法

摘要

本发明属于食品安全快速检测技术领域，具体涉及用于快速检测阪崎肠杆菌的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法，包括以玻碳电极为基础电极，以聚酰胺树枝状大分子材料结合还原性石墨烯纳米复合物为电活性修饰膜层，固定于玻碳电极表面，然后采用物理吸附法或采用牛血清白蛋白－戊二醛交联方法固定化辣根过氧化物酶标记的阪崎肠杆菌抗体制备纳米免疫传感器；本发明将该纳米免疫传感器用于食品中的阪崎肠杆菌的检测，其结果与国标方法结果一致，但该方法具有灵敏度高、特异性好、精确度高，检测时间短，是一种简便快速、精度高的阪崎肠杆菌的检测方法，具有广阔的应用前景。

主权项

一种用于快速检测阪崎肠杆菌的纳米免疫传感器的制备方法，以玻碳电极为基础电极，以聚酰胺树枝状大分子材料结合还原性石墨烯纳米复合物为电活性修饰膜层，具体将该纳米复合修饰物固定于玻碳电极表面，然后采用物理吸附法或采用牛血清白蛋白－戊二醛交联方法固定化辣根过氧化物酶标记的阪崎肠杆菌抗体制备而成纳米免疫传感器；其特征是，包括以下步骤:a.电极预处理将玻碳电极用氧化铝抛光粉抛光打磨至镜面后用蒸馏水清洗干净，再依次用二次去离子水、无水乙醇、二次去离子水超声清洗3min～5min，用氮气吹干玻碳电极，然后,将pH值为7.0的磷酸盐缓冲液放入烧杯中,再加入铁氰化钾、氯化钾和过氧化氢,使其浓度分别为2mmol/L、0.1mol/L和0.5mmol/L，得到电解质溶液,然后将玻碳电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝或铂片对电极插入上述电解质溶液中,连接PAR 270电化学工作站；用PAR 270电化学工作站进行循环伏安法扫描处理，扫描速度为50mV·s‑1，扫描电位范围在‑0.2V～+0.6V之间，持续扫描直到循环伏安图稳定之后，取出玻碳电极用二次蒸馏水清洗净，用氮气吹干备用；b.石墨烯‑聚酰胺‑胺复合物的制备将一定量的石墨烯粉末加入到二次蒸馏水中，使其浓度为0.5mg/ml，搅拌1min～2min，并超声处理15min～20min，得到均匀一致的黑色石墨烯悬浮液,备用；将2.0代聚酰胺‑胺溶于体积浓度为1％的乙酸溶液中，使聚酰胺‑胺的浓度为1.0×10‑3g/mL，室温的条件下，磁力搅拌55min～60min，得到聚酰胺‑胺溶液，然后将聚酰胺‑胺溶液和上述的石墨烯悬浮液按体积比1:1混合均匀，将混合溶液超声处理1.5h～2h，得到均匀稳定的石墨烯‑聚酰胺‑胺纳米复合物溶液；c.免疫传感器的制备准确量取3～8μL步骤b得到的石墨烯‑聚酰胺‑胺纳米复合物溶液滴涂到步骤a得到的玻碳电极表面，于室温下自然晾干或用便携式红外干燥器烘干，然后在玻碳电极表面滴涂与石墨烯‑聚酰胺‑胺纳米复合物同体积的辣根过氧化物酶标记的阪崎肠杆菌抗体,并置于4℃冰箱内反应1.5h～2h，再滴涂同体积的1wt％牛血清白蛋白溶液于37℃温度下处理55min～60min封闭非特异性吸附位点，将修饰后的电极取出，用二次去离子水冲洗去除未结合的多余辣根过氧化物酶标记的阪崎肠杆菌抗体，得到阪崎肠杆菌纳米免疫传感器，在4℃避光的条件下保存备用。