[发明专利]GNAS 基因突变检测试剂

摘要

本发明提供了GNAS基因突变检测试剂盒包括光学孔板及反应孔中标记的PAP聚合酶、缓冲剂、特异性引物、dNTP和PPi；所述试剂盒可用于检测全血白细胞基因组DNA中体细胞GNAS基因201密码子3种基因突变，即R201H(CGT‑CAT)、R201L(CGT‑CTT)和R201C(CGT‑TGT)，从而辅助临床诊断体细胞GNAS基因突变所引起的MAS综合症。

主权项

1.GNAS 基因突变检测试剂盒，其特征在于：是采用以焦磷酸化激活的聚合反应为基础的核酸扩增技术来扩增体细胞GNAS基因，从而实现对扩增的片段3种基因突变R201H、R201L和R201C的检测并以辅以GNA基因保守序列基因组DNA总量检测作为内对照；所述试剂盒包括光学孔板及反应孔中标记的PAP聚合酶、缓冲剂、特异性引物、dNTP和PPi和光学封板膜，所述光学孔板为光学96孔板，每4孔一组，所述PAP聚合酶是含F667Y 突变的Taq聚合酶、所述缓冲剂是指每1x缓冲剂含有50mM Tris‑HCl、10mM (NH₄)₂SO₄、2mM MgCl₂, pH 8.0；所述特异性引物为突变体‑1引物、 突变体‑2引物、 突变体‑3引物、总量DNA引物和野生型GNAS基因引物，所述突变体‑1 R201H为CGT to CAT，突变体‑2 R201L为CGT to CTT，突变体‑3 R201C为CGT to TGT，其中，所述突变体‑1引物的序列为5’‑TGGTCTCAAAGATTCCAGAAGTCAGGACAddT‑3’；所述突变体‑2引物的序列为5’‑TGGTCTCAAAGATTCCAGAAGTCAGGACAddA‑3’；所述突变体‑3引物的序列为5’‑GGTCTCAAAGATTCCAGAAGTCAGGACACddA‑3’；所述总量DNA引物的序列为5’‑CTTGGTCTCAAAGATTCCAGAAGTCAGGAddC‑3’；所述野生型GNAS基因引物的序列为5’‑CACCAACTGTTTCGGTTGGCTTTGG/FAM‑dT/G‑3’。