[发明专利]转基因大豆MON87705的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种转基因大豆MON87705的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。引物组由5条特异性引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO1~5所示。检测试剂盒包括检测引物溶液、具有链置换活性的DNA聚合酶、10×反应缓冲液、dNTPs溶液、显色剂。检测方法是采用特异性引物及具有链置换活性的DNA聚合酶，在63~65℃对样品DNA模板进行扩增，并采用加入显色剂观察颜色变化的方法，判断样品是否含有转基因大豆MON87705成分。本发明不需要特殊仪器，具有快速高效、操作简便、特异性强等特点，适合现场检测。

主权项

转基因大豆MON87705的LAMP检测试剂盒，包括以下组分：(1)检测引物溶液：转基因大豆MON87705的LAMP检测引物组，包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP和环引物LB，其核苷酸序列分别如下所示：外引物F3：GGTAATTACTCTTTCTTTTTCTCC(SEQ ID NO：1)；外引物B3：TCTACTCATCCTTAGCGAGT(SEQ ID NO：2)；内引物FIP：TGTAAATGGCTTCATGTCCGGTTTTATATTGACCATCATACTCATTGC(SEQ ID NO：3)；内引物BIP：TTGAAGAGACTCAGGGTGTTGTTTTCAACTCTCATATTTTTTTCAGGAC(SEQ ID NO：4)；环引物LB：ATCACTGCGGTTTGGCCTTTG(SEQ ID NO：5)；由上述的5条引物配制的检测引物溶液，外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP和环引物LB的浓度依次为4～6μmol/L、4～6μmol/L、32～48μmol/L、32～48μmol/L和4～6μmol/L；(2)具有链置换活性的DNA聚合酶：浓度为7～9U/μL；(3)10×反应缓冲液：200mmol/L Tris‑HCl、pH 8.8，100mmol/L KCl，100mmol/L，(NH4)2SO4，40～100mmol/L MgSO4，6～14mol/L甜菜碱；(4)dNTPs溶液，由浓度分别为10mmol/L的dATP、dCTP、dGTP、dTTP四种脱氧核糖核苷酸溶液等体积混合而成；(5)显色剂：1000×SYBR GREEN I荧光染料。