[发明专利]一种鲫鱼降压肽的制备方法

摘要

本发明提供了一种鲫鱼降压肽的制备方法，属于生物技术领域。制备步骤包括酶解鲫鱼蛋白制备酶解液、从酶解液中分离纯化降血压肽和降血压肽序列的测定。本发明集现代酶工程技术与肽的纯化鉴定技术于一体，对鲫鱼蛋白进行了深入的开发利用，该降压肽具有较高的ACE抑制活性，IC50值为0.24mg/mL。

主权项

一种鲫鱼降压肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1) 酶解鲫鱼蛋白制备酶解液将鲫鱼肉绞成肉糜，加水打浆，然后加入2‰(w/w) 活力6×10⁵U/g 的木瓜蛋白酶，调节pH 值到5.5‑6.0，温度55‑60℃，搅拌酶解5 小时，灭酶，转速3000rpm 离心20min，取上清液，即酶解液；(2) 从酶解液中分离纯化降血压肽将酶解液用2％ (w/v) 活性碳脱色20min，然后过2000Da 的超滤膜超滤，将超滤小于2000Da 的超滤液过Sephadex G‑15 柱(1.6×100cm，Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ，USA)，流速1.0mL/min，采用自动部分收集仪收集洗脱液，测定ACE 抑制活性，得到具有较高的ACE 抑制活性组分，进一步用反相高效液相色谱柱(9.4×250mm，AKTA，Agilent Technologies Co.，Ltd.，USA) 分离，得到具有较高的ACE 抑制活性的降压肽，冷冻干燥； (3) 降血压肽的序列测定将分离纯化得到的具有高活力的ACE 抑制肽，用6N 的HCl 在110℃全水解24 小时，用氨基酸自动测定仪测定氨基酸组成；同时，通过质谱仪分析肽的分子量和肽段的分布，进行肽的氨基酸序列分析。