[发明专利]携带人乳头瘤病毒16型多点突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

摘要

本发明携带HPV‑16 E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法，是将具有致瘤性的HPV‑16的E7抗原基因多点突变为无致瘤性的E7抗原基因，再将该突变后基因插入已经剔除结构基因的腺相关病毒载体中而获得的。该重组腺相关病毒可将其携带的突变型HPV‑16 E7mm抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被该组腺相关病毒感染的DC所诱导的CTL在体外和患者体内均可有效地抑制HPV‑16 E7阳性细胞的生长或者杀灭HPV‑16 E7阳性的细胞，且无致瘤性。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗HPV‑16感染及其相关的抗肿瘤药物。

主权项

一种携带人乳头瘤病毒16型(HPV‑16)突变型E7mm抗原基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体，是将腺相关病毒(AAV)载体中的腺相关病毒结构基因Rep和Cap剔除并带有AVV的p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、SV40病毒启动子和beta肌动蛋白启动子(β‑actin)中的任意一个启动子的AVV载体作为出发载体，将多点突变型HPV‑16 E7mm抗原基因插入出发载体中，获得全新的rAVV载体，即携带HPV‑16 E7mm抗原基因的重组腺相关病毒载体；所述多点突变型HPV‑16 E7mm抗原基因为以下之一：具有nt175(58aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV‑16 E7mm22，其核苷酸序列如序列表中序列3所示；具有nt271(91aa)、nt280(94aa)两个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV‑16 E7mm23，其核苷酸序列如序列表中序列4所示；具有nt175(58aa)、nt271(91aa)、nt280(94aa)三个突变位点的多点突变型基因，命名为HPV‑16 E7mm3，其核苷酸序列如序列表中序列5所示；所述腺相关病毒载体为剔除腺相关病毒(AAV)结构基因Rep和Cap的腺相关病毒载体，其携带的启动子为p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子(β‑actin)或SV40病毒早期启动子中的任意一个。