[发明专利]一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法

摘要

本发明公开了一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法。本发明使用人工培养基进行液态发酵生产红曲霉菌丝体，再应用混合蛋白酶复合酶解法对红曲霉菌丝体中的蛋白质进行提取，即先利用碱性蛋白酶处理，再用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解红曲霉菌丝体中的蛋白质，并通过浓缩、真空冷冻干燥得到小分子活性多肽产品。通过对红曲多肽理化性质的测定及采用高效液相色谱法对其ACE抑制活性的研究，发现了红曲多肽具有较好的降血压功效，具有开发降血压保健食品的潜力。本发明的方法具有原料不受季节限制，操作简单、节约成本、减少环境污染、蛋白质提取率高和产品降血压活性好的优点。

主权项

1.一种红曲霉液态发酵制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)红曲霉液态发酵：使用斜面活化培养基培养红曲菌种，进行活化；取培养后的斜面种子一支，将菌体及孢子洗脱至生理盐水中制成混合液，按二级液体种子培养基体积的10％的接种量接种到装有二级液体种子培养基，于200rpm，30℃培养48h～72h；将二级液体种子按发酵培养基体积的10％的接种量接种到发酵培养基中于30℃，200rpm培养5d，得到红曲霉菌丝体；其中红曲霉采用中国典型培养物保藏中心保藏的，保藏编号为CCTCC NO:M2013082的红曲菌种；二级液体种子培养基质量比配方为：大米粉3％，硝酸钠0.5％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.1％，其余为去离子水，使用乳酸调节pH 5.5～6；发酵培养基质量比配方为：葡萄糖4％，蛋白胨2％，可溶性淀粉3％，硝酸钠0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.2％，其余为去离子水，使用乳酸调节pH 5.5～6；(2)获得菌体干粉：用去离子水清洗红曲霉菌丝体，过滤去除滤液，菌体置于‑80℃冰箱冷冻12h，调节冷冻干燥机条件为‑85℃，真空度‑0.01mPa，将菌体进行真空冷冻干燥得到菌体干粉；(3)酶解处理：称取一定量红曲菌体干粉，加入菌体干粉100倍重量的去离子水，加入质量为菌体干粉原料0.3％的碱性蛋白酶，调节pH至7‑8.5，保温酶解2h；酶解结束后，将水浴锅的温度调至90℃，保温维持15min，除去酶解液中碱性蛋白酶的活性；温度降低至50℃以下时，向灭活了蛋白酶的红曲菌体蛋白水解液中加入菌体干粉原料质量的0.2％的木瓜蛋白酶，保持酶解温度在50℃‑60℃，调节pH在6‑7，维持1h；调节水浴锅的温度至90℃，维持15min，灭活木瓜蛋白酶的酶活性；加入菌体干粉原料质量的0.3％的胃蛋白酶，保持酶解温度在30℃‑40℃，调节pH在3‑4，维持1.5h；(4)后处理：对酶解液进行减压蒸发浓缩，得到红曲多肽浓缩液，对浓缩后的酶解液进行真空冷冻干燥，即得到对ACE有抑制活性的红曲多肽产品。