[发明专利]小反刍兽疫病毒CH/GDDG/2014株全基因组序列及其扩增引物对

摘要

本发明公开了小反刍兽疫病毒CH/GDDG/2014株全基因组序列及其扩增引物对。本发明将病毒基因组序列分为11个片段，用一步法RT‑PCR方法扩增相应的cDNA，将扩增的PCR片段克隆到pGM‑T载体上进行核酸测序。本发明可以有效地扩增出目的片段，提供了全基因组序列，有利于研究小反刍兽疫病毒的遗传学、分子流行病学及反向遗传学研究等。

主权项

1.一种测定小反刍兽疫病毒全基因组的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取小反刍兽疫病毒的RNA；(2)配制50μL PCR反应体系，用引物对小反刍兽疫病毒全基因组序列进行分段RT‑PCR扩增；(3)目的片段的回收、连接、转化、阳性菌的鉴定及测序；(4)利用DNAStar生物信息学软件对所测定的序列进行比对分析、序列拼接，得到小反刍兽疫病毒全基因组序列；50μL RT‑PCR反应体系包括：2倍浓度Buffer 25μL，每段扩增上下游引物各1μL，Mix溶液1μL，病毒RNA 5μL，灭菌双蒸水17μL；PCR反应程序包括：50℃反转录30min，95℃预变性5min，35个循环，所述循环为：95℃变性30s，53℃～60℃退火30s，72℃延伸 50s～188s，72℃10min；所述小反刍兽疫病毒为CH/GDDG/2014株，所述序列如SEQ ID No.1所示；所述引物序列如SEQ ID No.2～23所示；其中引物和扩增片段的对应关系为：