[发明专利]亚硝酸菌的高通量筛选方法

摘要

本发明属于微生物技术领域，涉及一种亚硝酸菌的高通量筛选方法。包括1）、菌落的高通量分离；2）、菌落生成亚硝酸效果的高通量检测与亚硝酸菌的分离。本发明方法是亚硝酸菌的高通量筛选技术，可替代基于传统接种针/环的常规筛选技术，对于提高亚硝酸菌的筛选效率具有重要意义。

主权项

1.亚硝酸菌的高通量筛选方法，使用的接种影印工具，包括圆盘状、同样大小的底板、中间板和面板，它们通过边缘上均匀分布的四根不锈钢螺丝固定，在四根不锈钢螺丝外套铜螺柱，底板、中间板、面板的中心与一手柄通过螺母固定连接；在中间板和面板上有1448个小孔，有10~1448根平头不锈钉穿过中间板和面板的小孔，且钉头在底板和中间板之间可上下移动；其特征在于：具体过程包括如下步骤：(1)平板影印接种菌取在121℃的温度下灭菌的10cm培养皿放入洁净工作台中紫外线照射30分钟，取黑臭河水倒入清洁的灭菌培养皿内，用所述接种影印工具沾取菌悬液后放置于事先制备好的经灭菌的10cm培养皿上， 用记号笔在接种影印工具定位孔对应的培养皿边缘做定位孔标记，盖上平皿盖25℃倒置培养；(2)平板影印传代待菌落明显又尚未黏连融合时，采用无菌操作，用同一接种影印工具的定位孔对准培养皿上的定位孔标记，放下接种影印工具，不锈平头钉上将沾染原平板上对应的菌落，再转印于另一个经灭菌的黑臭河水平板上进行传代，盖上皿盖25℃倒置培养，将原代平板于4℃保藏待用；(3)亚硝酸菌菌落识别用直径95mm的玻璃纤维滤膜浸润亚硝氮显色液后，将其紧贴至子代平板表面，记录贴膜10分钟时有红色色斑出现的菌落，在原代平板上挑取相同或相应位置的菌落，采用平板划线法分离纯化亚硝酸菌。