[发明专利]一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用

摘要

本发明公开了一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用，该嗜热毛壳菌纤维素酶采用里氏木霉、或毕赤酵母表达。该嗜热毛壳菌纤维素酶为具有嗜盐性能的中性纤维素酶，高浓度的盐对中性纤维素酶的活性有明显的提升作用，该中性纤维素酶的最适作用温度为57～63℃，这样抛光温度与染色温度一致，在抛光过程的同时，染料可以充分匀染，保证染色均匀。

主权项

一种嗜热毛壳菌纤维素酶在抛光染色一浴工艺中的应用，其特征在于，在盐浓度为10g/L～90g/L和温度为57～63℃条件下使用所述嗜热毛壳菌纤维素酶和染料进行抛光染色一浴，所述嗜热毛壳菌纤维素酶按如下方法制得：1)嗜热毛壳菌纤维素酶基因的合成，合成的嗜热毛壳菌纤维素酶基因的序列如SEQ ID NO.2所示,合成的基因编码更加符合里氏木霉高效表达的基因编码；2)嗜热毛壳菌纤维素酶表达质粒的构建；3)里氏木霉的转化与嗜热毛壳菌纤维素酶高产菌株的筛选，得到的嗜热毛壳菌纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，分泌到细胞外的嗜热毛壳菌纤维素酶为SEQ ID NO.3所示序列的第22‑314位氨基酸序列；步骤3)具体为：首先，用EcoRI降解步骤2)构建的质粒形成质粒片段，采用化学转化方法将该质粒片段转入里氏木霉RUT C‑30宿主细胞；然后在含有潮霉素B的PDA培养基上培养，再将生长旺盛的菌落接种置PDA培养基上，通过生长和发芽，将孢子再转移到新鲜PDA培养基上，以分离纯化转代稳定的转化子，将这些转化子的孢子接种在木霉纤维素酶诱导培养液，培养后，采样离心，取上清液进行SDS‑PAGE电泳分析；所述木霉纤维素酶诱导培养液的pH值为4.8，用乳糖作为诱导物。