[发明专利]原核表达重组质粒pET-IFNα、海藻酸钠包裹的干扰素及用途在审
| 申请号： | 201510506455.5 | 申请日： | 2015-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN105087623A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 沈锦玉;袁雪梅;郝贵杰;姚嘉赟;潘晓艺;蔺凌云;徐洋;尹文林 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/56;A61K38/21;A61P37/00 |
| 代理公司： | 湖州金卫知识产权代理事务所(普通合伙) 33232 | 代理人： | 裴金华 |
| 地址： | 313000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及原核表达重组质粒pET-IFNα、海藻酸钠包裹的干扰素及用途。原核表达重组质粒pET-IFNα，是通过以下方法制备的：反转录-PCR扩增-连接到T载体-转化至大肠杆菌-质粒抽提-酶切-回收IFNα片段-插入原核表达载体的多克隆位点-转化大肠杆菌-抽提质粒-酶切。本发明还通过试验验证了该干扰素蛋白海藻酸钠微球：结果显示注射干扰素重组蛋白海藻酸钠微球和对照组的草鱼累计死亡率分别为16.06%和38.41%；免疫组的相对保护率达到58.17%，表明其具有较好的抗草鱼呼肠孤病毒的效果。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 重组 质粒 pet ifn 海藻 包裹 干扰素 用途 | ||
【主权项】：
原核表达重组质粒pET‑IFNα，其特征在于它是通过以下方法制备的：（1）、以草鱼RNA为模板，用反转录试剂盒进行反转录和PCR扩增，制得扩增产物；（2）、扩增产物纯化后连接到T载体，制得连接产物；（3）、连接产物转化至大肠杆菌DH5ɑ，筛选阳性克隆产物；（4）、阳性克隆产物进行质粒抽提，用BamHⅠ、HindⅢ进行双酶切，酶切产物回收IFNα片段，插入原核表达载体pET‑30a的多克隆位点，转化大肠杆菌DH5ɑ，然后抽提质粒进行酶切，得到重组质粒pET‑IFNα；所述反转录试剂盒的引物如下：pET‑IFNα‑U：CGCGGATCCaaaactcaaatgtggacgtapET‑IFNα‑L：CCCAAGCTTttatcgtctgttggcaat。
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