[发明专利]一种细胞源性质控品的制备方法

摘要

本发明涉及细胞系质控品制备方法，具体讲，涉及一种细胞源性质控品的制备方法。所述制备方法包括如下步骤：细胞的准备和细胞的石蜡包埋；其中，细胞的准备包括细胞的复苏、细胞传代培养和细胞的收集；细胞的石蜡包埋包括细胞收集、细胞固定、细胞脱水、石蜡包埋。所述制备方法是直接用含有相关基因片段的细胞来制备质控品，其质控品本身就是来源于含有相同突变的肿瘤细胞，和样本的来源相同，其与要检测的样本本身同源性更好，与样本更接近，使得检测结果更具有说服力，适合于大范围推广。

主权项

一种细胞源性质控品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)、细胞的准备1)细胞的复苏：从液氮罐中取出对应细胞冻存管，放入备好的42℃温水中快速摇动，直至管中的液体恢复常温；于超净台中将冻存管用质量百分含量75％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加5mL培养液，在1500r/min速度下离心5分钟，弃去上层液，加入培养液后接种于培养皿中，置37℃温箱静置培养；2)细胞传代培养：于超净台中取复苏的培养细胞，吸去培养皿中的培养液，沿皿壁加入2mL的1×PBS清洗细胞，吸去PBS，再用PBS清洗一次；向培养皿中加入0.5mL的质量百分含量为0.25％胰酶，摇晃培养皿使胰酶与皿底细胞充分接触消化，1min后吸去胰酶，于显微镜下观察细胞状态，至细胞基本恢复圆滑状态；向培养皿中加入3mL培养液，用移液器将皿底细胞来回吹打混匀，显微镜下观察细胞浓度，视细胞浓度向另一培养皿中加入600～1500μl的细胞悬浮液，并加入3mL培养液，用移液器轻轻吹打混匀，显微镜下观察细胞密度；置37℃温箱静置培养，观察生长情况；3)细胞的收集：贴壁生长于培养皿中的细胞，用胰酶消化完全后直接回收到离心管中，收集完毕的细胞放在0℃冰箱保存；(2)、细胞的石蜡包埋1)细胞收集：将培养出的已经计数好的细胞收集于离心管中，1500r/min离心5分钟，弃上清；2)细胞固定：向离心管中加入质量百分含量10％的中性福尔马林，摇匀后斜放在4度冰箱中固定60分钟，然后1500r/min离心5分钟，弃上清；加入适量PBS清洗一次，1500r/min离心5分钟，弃上清，保留少许PBS以用作混匀细胞；3)细胞脱水：按照乙醇浓度从低到高的梯度进行，每步脱水完成时1500r/min离心5分钟，弃上清：50％乙醇30分钟；70％乙醇30分钟；85％乙醇30分钟；95％乙醇30分钟；100％乙醇20分钟；100％乙醇20分钟；4)石蜡包埋：在62℃环境下于通风橱中进行操作，具体操作如下：1/2体积的二甲苯加1/2体积的石蜡30分钟，吸去二甲苯及石蜡；完全石蜡1小时，对细胞进行初步包埋，待石蜡冷却后对包埋的细胞块进行修剪，得到含有细胞的石蜡包埋块；然后进行二次包埋，用石蜡包埋1小时，降温，待石蜡凝固即可。