[发明专利]一种细胞源性质控品的制备方法在审

专利信息
申请号: 201510514774.0 申请日: 2015-08-20
公开(公告)号: CN105177124A 公开(公告)日: 2015-12-23
发明(设计)人: 刘昌军;刘沛;朱柳;丁朋举;李江浩 申请(专利权)人: 北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 北京同辉知识产权代理事务所(普通合伙) 11357 代理人: 刘洪勋;郭丽英
地址: 100176 北京市大兴区经济技*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明涉及细胞系质控品制备方法,具体讲,涉及一种细胞源性质控品的制备方法。所述制备方法包括如下步骤:细胞的准备和细胞的石蜡包埋;其中,细胞的准备包括细胞的复苏、细胞传代培养和细胞的收集;细胞的石蜡包埋包括细胞收集、细胞固定、细胞脱水、石蜡包埋。所述制备方法是直接用含有相关基因片段的细胞来制备质控品,其质控品本身就是来源于含有相同突变的肿瘤细胞,和样本的来源相同,其与要检测的样本本身同源性更好,与样本更接近,使得检测结果更具有说服力,适合于大范围推广。
搜索关键词: 一种 细胞 性质 制备 方法
【主权项】:
一种细胞源性质控品的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)、细胞的准备1)细胞的复苏:从液氮罐中取出对应细胞冻存管,放入备好的42℃温水中快速摇动,直至管中的液体恢复常温;于超净台中将冻存管用质量百分含量75%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加5mL培养液,在1500r/min速度下离心5分钟,弃去上层液,加入培养液后接种于培养皿中,置37℃温箱静置培养;2)细胞传代培养:于超净台中取复苏的培养细胞,吸去培养皿中的培养液,沿皿壁加入2mL的1×PBS清洗细胞,吸去PBS,再用PBS清洗一次;向培养皿中加入0.5mL的质量百分含量为0.25%胰酶,摇晃培养皿使胰酶与皿底细胞充分接触消化,1min后吸去胰酶,于显微镜下观察细胞状态,至细胞基本恢复圆滑状态;向培养皿中加入3mL培养液,用移液器将皿底细胞来回吹打混匀,显微镜下观察细胞浓度,视细胞浓度向另一培养皿中加入600~1500μl的细胞悬浮液,并加入3mL培养液,用移液器轻轻吹打混匀,显微镜下观察细胞密度;置37℃温箱静置培养,观察生长情况;3)细胞的收集:贴壁生长于培养皿中的细胞,用胰酶消化完全后直接回收到离心管中,收集完毕的细胞放在0℃冰箱保存;(2)、细胞的石蜡包埋1)细胞收集:将培养出的已经计数好的细胞收集于离心管中,1500r/min离心5分钟,弃上清;2)细胞固定:向离心管中加入质量百分含量10%的中性福尔马林,摇匀后斜放在4度冰箱中固定60分钟,然后1500r/min离心5分钟,弃上清;加入适量PBS清洗一次,1500r/min离心5分钟,弃上清,保留少许PBS以用作混匀细胞;3)细胞脱水:按照乙醇浓度从低到高的梯度进行,每步脱水完成时1500r/min离心5分钟,弃上清:50%乙醇30分钟;70%乙醇30分钟;85%乙醇30分钟;95%乙醇30分钟;100%乙醇20分钟;100%乙醇20分钟;4)石蜡包埋:在62℃环境下于通风橱中进行操作,具体操作如下:1/2体积的二甲苯加1/2体积的石蜡30分钟,吸去二甲苯及石蜡;完全石蜡1小时,对细胞进行初步包埋,待石蜡冷却后对包埋的细胞块进行修剪,得到含有细胞的石蜡包埋块;然后进行二次包埋,用石蜡包埋1小时,降温,待石蜡凝固即可。
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