[发明专利]ermC基因在检测土壤抗生素抗性污染水平中的应用与方法有效
| 申请号： | 201510523039.6 | 申请日： | 2015-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN105018636B | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | 韩雪梅;陈莹;李合莲;梁玉 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 曹丽;张勇 |
| 地址： | 250022 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种ermC基因在检测土壤抗生素抗性污染水平中的应用与方法。根据特定抗性基因ermC富集倍数与ARGs总富集倍数间具有极显著的正相关关系(P<0.001)，根据土壤中这种基因的富集水平对土壤抗生素抗性污染的水平进行检测和评价，极大地节约了人力、物力，并能较好地反应土壤抗生素抗性污染水平。 | ||
| 搜索关键词： | ermc 基因 检测 土壤 抗生素 抗性 污染 水平 中的 应用 方法 | ||
【主权项】：
1.一种ermC 基因在检测土壤抗生素抗性污染水平中的方法，其特征是：具体包括以下的步骤：（1）选用正向引物序列如SEQ ID No.1和反向引物序列如SEQ ID No.2，对目的抗性基因ermC 进行PCR扩增；（2）切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因，将抗性基因连接在T载体上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，涂LB/氨苄/IPTG/X-Gal平板后挑选阳性克隆子，用含有氨苄的LB培养液进行培养；（3）检测从含有氨苄的LB培养菌液中提取的质粒的浓度，换算出单位体积质粒所携带抗性基因的拷贝数，将含有目的基因的质粒按10倍梯度进行系列稀释，作为抗性基因标准品；（4）提取土壤DNA，土壤DNA和抗性基因标准品同时进行定量PCR扩增ermC 基因，根据ermC 基因的富集倍数和公式y=734.623+2.606x，其中x为ermC 富集倍数，y为ARGs总富集倍数，进而得出土壤抗生素抗性污染水平。
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