[发明专利]一种饮水感染结核分枝杆菌豚鼠模型的建立方法

摘要

本发明提供一种饮水感染结核分枝杆菌豚鼠模型的建立方法，通过豚鼠饮水感染结核分枝杆菌，经过旧结核菌素试验，脏器病理学观察与病变指数分级，建立起饮水感染结核分枝杆菌豚鼠模型，广泛应用于抗TB药物和疫苗等生物制剂的研究开发与效果评价。

主权项

一种饮水感染结核分枝杆菌豚鼠模型的建立方法,其特征在于包含如下步骤：1）实验动物准备：选用健康豚鼠，实验前严格检疫，排除Mtb潜伏感染；2）感染用Mtb菌株制备: 取Mtb H37rv菌株接种于新鲜改良罗氏斜面培养基上，37 ℃培养3周;取培养基上生长的Mtb菌落，无菌操作刮下并准确称重后，置于无菌研钵内研磨成混浊菌悬液，然后将菌液分装到1.5 mL无菌冻存管，置入‑80 ℃保存；使用平皿培养法,采用7H10培养基确定储存菌种的菌落形成单位；从‑80 ℃冰箱取出菌种，置37 ℃水浴箱内溶解，将菌液用生理盐水按实验需要稀释配制成不同浓度的菌液；稀释好的菌液再接种于7H10平皿上，37 ℃培养3‑5周，确定实际细菌的数量；3）豚鼠饮水感染结核分枝杆菌：在生物安全三级实验室选用豚鼠，攻毒前豚鼠禁水8h，结核分枝杆菌菌液室温融化后混入400mL饮用水中至攻毒浓度2×10³‑2×10⁸ CFU/mL，每个笼子放1只豚鼠和1个400mL饮用水瓶，豚鼠1天内会将400mL含有结核分枝杆菌的水饮用完，待含结核分枝杆菌饮用水被豚鼠喝完后，更换新的饮水瓶，动物供应正常饮用水和食物。