[发明专利]自然酶活性脂蛋白相关磷脂酶A2及制备过程在审
| 申请号： | 201510525323.7 | 申请日： | 2015-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN105219750A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 关大伟;李宝民;刘木清;于顺;蔡燕宁;高大松;关恒;赵雪 | 申请（专利权）人： | 长春恒晓生物科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/866;C07K16/40;C07K16/06;C07K1/22 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 白冬冬 |
| 地址： | 130119 吉林省长春*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 一种自然酶活性脂蛋白相关磷脂酶A2及制备过程，属于生物技术领域。本发明的目的是提供LP-PLA2-N端抗体，能特异性LP-PLA2-N端，不干扰LP-PLA2 C端酶催化结构区域酶活性，适合进行抗体扑获LP-PLA2酶活性测定试验，扑获出血液中LP-PLA2，或LP-PLA2-小分子复合物，再特异性测定LP-PLA2酶活性的自然酶活性脂蛋白相关磷脂酶A2及制备过程。本发明的步骤是：构建pVL1392-Flag-LP-PLA2载体，与线性AcNPV DNA 共转染产生重组Flag-LP-PLA2 AcNPV，表达出带有8个氨基酸残基短肽LP-PLA2，纯化出具有自然酶活性和抗原性Flag-LP-PLA2蛋白，构建pVL1392-His-LP-PLA2-N载体，制备成His-LP-PLA2-N端蛋白亲和层析柱，分离和纯化出抗LP-PLA2-N端抗体。本发明测定LP-PLA2酶活性方法具有特异性强，应用广泛，检测灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 自然 活性 脂蛋白 相关 磷脂酶 a2 制备 过程 | ||
【主权项】：
一种自然酶活性脂蛋白相关磷脂酶A2及制备过程，其特征在于：提取THP‑1 RNA，合成THP‑1 cDNA基因库，用PCR扩增出LP‑PLA2 DNA，构建pVL1392‑Flag‑LP‑PLA2载体；pVL1392‑Flag‑LP‑PLA2载体与线性AcNPV DNA 共转染到SF9细胞，产生重组Flag‑LP‑PLA2 AcNPV；重组Flag‑LP‑PLA2 AcNPV感染SF9细胞并表达出带有8个氨基酸残基短肽LP‑PLA2；用Anti‑Flag M2 affinity agarose纯化出具有自然酶活性和抗原性Flag‑LP‑PLA2 蛋白；构建pVL1392‑His‑LP‑PLA2‑N载体，产生重组His‑LP‑PLA2‑N AcNPV，感染SF9细胞并表达出带有6个氨基酸残基短肽LP‑PLA2‑N；His‑Select HF Nickel affinity Gel纯化出His‑LP‑PLA2‑N端蛋白并制备成His‑LP‑PLA2‑N端蛋白亲和层析柱；Flag‑LP‑PLA2免疫动物产生LP‑PLA2抗血清，用His‑LP‑PLA2‑N端蛋白亲和层析柱，分离和纯化出抗LP‑PLA2‑N端抗体。
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