[发明专利]PH450酶的大量制备方法

摘要

本发明提供了一种PH450酶的大量制备方法，包括：获取蓝藻并进行大量培养，并在培养过程中用PH450酶诱导剂进行诱导；在大量培养结束后收集蓝藻细胞，提取蓝藻细胞总蛋白；用人PH450酶作为抗原进行免疫反应，制备多克隆抗体；以多克隆抗体作为亲和介质制备亲和层析柱；将提取的蓝藻细胞总蛋白于所述亲和层析柱进行过柱。本发明上述PH450酶的大量制备方法，基于蓝藻和人PH450酶在蛋白质的三维结构、活性功能几乎完全相同，且蓝藻代谢简单、易于诱导和分离的情形，将蓝藻诱导培养产物用PH450酶的特异性抗体进行亲和层析；相比现有的基因工程菌发酵制备的方法，本发明大量制备的PH450酶是蓝藻细胞代谢中产生的活性酶，品质比较好具有活性；而且纯化分离过程简单，方法的效益更高。

主权项

1.一种PH450酶的大量制备方法，其特征在于，包括如下步骤：获取蓝藻并进行大量培养，并在培养过程中用PH450酶诱导剂进行诱导；在所述大量培养结束后收集蓝藻细胞，提取蓝藻细胞总蛋白；用人PH450酶作为抗原进行免疫反应，制备多克隆抗体；以所述多克隆抗体作为亲和介质制备亲和层析柱；将所述提取的蓝藻细胞总蛋白于所述亲和层析柱进行过柱；所述PH450酶诱导剂包括利福平和依非韦伦；所述利福平在蓝藻培养基中的浓度为0.8mmol/L；所述依非韦伦在蓝藻培养基中的浓度为0.4mmol/L；所述蓝藻为瑞士纳沙泰尔湖水晶蓝藻或“水生1042号”蓝藻；获取所述蓝藻并进行大量培养，并在培养过程中用PH450酶诱导剂进行诱导步骤中，还包括：向蓝藻培养基中添加瑞格列奈，所述瑞格列奈在蓝藻培养基中的浓度为0.1mmol/L；以所述多克隆抗体作为亲和介质制备亲和层析柱步骤中，所述亲和层析柱采用的固相基质为Sepharose CL 4B；将所述提取的蓝藻细胞总蛋白于所述亲和层析柱进行过柱步骤之前，还包括：将所述提取的蓝藻细胞总蛋白进行梯度沉降处理；将所述提取的蓝藻细胞总蛋白于所述亲和层析柱进行过柱步骤之前，还包括：将所述提取的蓝藻细胞总蛋白用不含有所述多克隆抗体的空白层析柱进行过柱；将所述提取的蓝藻细胞总蛋白于所述亲和层析柱进行过柱步骤之后，还包括：用洗脱液对所述亲和层析柱进行洗脱，并收集洗脱组分；将所述洗脱组分进行浓缩处理。