[发明专利]一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法

摘要

本发明涉及一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法，包括如下步骤(1)取已知来源的土壤样品，使用门塞尔比色卡检测样品颜色进行分类；(2)采用标准吸管法检测样品的粒径并进行分类；(3)将样品采用扫描电子显微镜对扫描图像进行检测并分类；(4)采用能谱法检测土壤样品进行分组建库；(5)将样品采用红外色谱法检测，分析土壤中含有的化合物并进行分类；(6)提取样品中的DNA进行荧光引物PCR并进行分类；(7)根据样品的来源地对应不同分类，建立鉴别土壤样品来源筛选库。本发明可以明确的区分不同地区土壤，从而为待测样品的土壤来源的提供有效的来源判定方法。

主权项

一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取已知来源的土壤样品，使用门塞尔比色卡检测样品颜色，将土样与带标准色阶的卡片相对照，检测土壤颜色，根据检测结果进行分类；以门塞尔标准色卡为对照，当样品主色调为红色时，样品被鉴定为红色土壤；当样品主色调为黄色时，样品被鉴定为黄色土壤；当样品主色调为黑色，样品被鉴定为黑色土壤；（2）采用标准吸管法检测样品的粒径，根据检测结果进行分类；当检测结果为50～2000µm时，为砂质土壤；当检测结果为2～50µm时，为壤质土壤；当检测结果小于2µm时，为黏质土壤；（3）将样品采用扫描电子显微镜对扫描图像进行检测，计算颗粒平均面积S，并分别归入S＜100µm2、100µm2≤S＜200µm2、200µm2≤S＜300µm2、300µm2≤S＜400µm2、400µm2≤S＜500µm2、500µm2≤S＜600µm2、600µm2≤S＜700µm2、700µm2≤S组中；（4）采用能谱法检测土壤样品，对Na、Ca、Fe、Ti元素进行分组建库；Na质量含量低于0.5%为低钠区，Na质量含量为0.5～1.5%为中钠区，Na质量含量高于1.5%为高钠区；Ca质量含量低于1%为低钙区，Ca质量含量为1～5%为中钙区，Ca质量含量高于5%为高钙区；Fe质量含量低于3%为低铁区，Fe质量含量为3～7%为中铁区，Fe质量含量高于7%为高铁区；Ti质量含量低于0.05%为极低钛区，Ti质量含量为0.05～0.5%为低钛区，Ti质量含量为0.5～1.0%为中钛区，Ti质量含量高于1.0%为高钛区；（5）将样品采用红外色谱法检测，定性分析样品中特殊的化学官能团，分析土壤中含有的化合物并进行分类；所述土壤中含有的化合物检测结果分类如下：当含有468.6~457cm‑1峰时，含有C‑X基团，为有机卤素化合物；当含有484~532 cm‑1峰时，含有P‑Cl基团，为有机磷化合物；当含有1612~1616cm‑1峰时，含有C=C基团，为烯烃类物质、含苯环类物质；当含有3107~3448cm‑1峰时，含有NH基团，为酰胺类化合物；当含有740~779cm‑1峰时，含有O‑N=O基团，为亚硝酸化合物；当含有1379~1436cm‑1峰时，含有C‑N=O基团，为亚硝基化合物；当含有1014~1024cm‑1峰时，含有C‑O‑C基团，为醚、酯类有机物；当含有3591~3626cm‑1峰时，含有OH基团，为醇、酚类有机物；（6）提取样品中的DNA，进行荧光引物PCR，然后经琼脂糖凝胶电泳纯化，经限制性内切酶MspⅠ酶切，根据T‑RFLP图谱中优势T‑Fs的有效片段长度的差异，对样品进行分类；所述有效片段为长度在50~650bp之间，且Ap值大于1%的片段；所述PCR扩增引物序列如下：27F‑FAM：5′‑AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3′；1492R：5′‑CGGCTACCTTGTTACGACTT‑3′；PCR扩增体系如下，总体系50μL：Mix缓冲液                     25μL引物27F‑FAM                   2μL引物1492R                     2μL基因组总DNA                   2μLddH2O                          19μL；PCR扩增程序如下：在94℃下预变性3 min，94℃下变性30 S，54℃退火30S，72℃延伸1min20 S，进行36个循环后，72℃补延伸10 min；（7）分别将不同的样品按照步骤（1）～（6）的方式进行分类，根据样品的来源地对应不同分类，建立鉴别土壤样品来源筛选库。