[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒S全基因扩增测序的方法及其应用有效
申请号: | 201510541403.1 | 申请日: | 2015-08-28 |
公开(公告)号: | CN105132585A | 公开(公告)日: | 2015-12-09 |
发明(设计)人: | 王亚欣;陈瑞爱;唐满华;赵大伟 | 申请(专利权)人: | 肇庆大华农生物药品有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
代理公司: | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人: | 张耐寒 |
地址: | 526238 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明提供一种猪流行性腹泻病毒S全基因扩增测序的方法及其应用,包括以下步骤:1)提取猪流行性腹泻病毒RNA;2)RT-PCR扩增:分别采用如SEQ ID No.1所示上游引物和如SEQ ID No.2所示下游引物扩增得到SCX1基因片段,采用如SEQ ID No.3所示上游引物和如SEQ ID No.4所示下游引物扩增得到SCX2基因片段;3)基因片段回收,并测序;4)拼接,得到猪流行性腹泻病毒S全基因,并测序。本发明使用两对重叠引物扩增S全基因,较之前使用3对或是5对基因,更加方便简捷;更快的扩增到S基因的全序列,有利于对所扩增的PEDV毒株进行分类和分析以及了解病毒的进化规律。 | ||
搜索关键词: | 种猪 流行性 腹泻 病毒 基因 扩增 方法 及其 应用 | ||
【主权项】:
一种猪流行性腹泻病毒S全基因扩增测序的方法,包括以下步骤:1)提取猪流行性腹泻病毒RNA;2)RT‑PCR扩增:采用如SEQ ID No.1所示上游引物和如SEQ ID No.2所示下游引物,对步骤1)提取的RNA进行RT‑PCR扩增,得到SCX1基因PCR产物;采用如SEQ ID No.3所示上游引物和如SEQ ID No.4所示下游引物,对步骤1)提取的RNA进行RT‑PCR扩增,得到SCX2基因PCR产物;3)基因片段回收:将步骤2)所得的SCX1基因PCR产物和SCX2基因PCR产物进行核酸电泳,回收SCX1基因片段和SCX2基因片段,并测序;4)拼接:将步骤3)获得的SCX1基因片段与SCX2基因片段进行拼接,得到猪流行性腹泻病毒S全基因,测序。
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