[发明专利]一种大肠杆菌无细胞体系生产HIV-1 gp41重组抗原的方法在审
| 申请号： | 201510546412.X | 申请日： | 2015-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN105039379A | 公开（公告）日： | 2015-11-11 |
| 发明（设计）人： | 徐志南;黄磊;来力;庄冰佳;蔡谨 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/16;C07K1/22 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种大肠杆菌无细胞体系生产HIV-1gp41重组抗原的方法，先将HIV-1gp41基因克隆到pIVEX2.4c质粒上，得到重组载体pIVEX2.4c-gp41；将重组载体pIVEX2.4c-gp41放到含有去污剂的大肠杆菌无细胞体系中表达，最后利用亲和层析纯化获得HIV-1gp41蛋白。本发明利用大肠杆菌无细胞体系生产HIV-1gp41蛋白，通过向反应体系中添加去污剂提高HIV-1gp41的可溶性，利用亲和层析纯化获得目标蛋白。此方法能有效提高HIV-1gp41重组抗原的生产能力，对利用大肠杆菌无细胞体系生产系列HIV重组抗原具有重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 细胞 体系 生产 hiv gp41 重组 抗原 方法 | ||
【主权项】：
一种大肠杆菌无细胞体系生产HIV‑1gp41重组抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合成HIV‑1gp41重组抗原全长基因，所述HIV‑1gp41重组抗原全长基因的基因序列如序列SEQ ID NO.1所示；(2)将HIV‑1gp41重组抗原全长基因克隆到pIVEX2.4c质粒上，得到重组载体pIVEX2.4c‑gp41；(3)将步骤(2)得到的重组载体pIVEX2.4c‑gp41放到大肠杆菌无细胞体系中表达，同时在体系中添加去污剂，所述去污剂为Brij78或Brij58，在大肠杆菌无细胞体系中的质量体积分数为5g/L；(4)利用亲和层析纯化分离，超滤浓缩后得到HIV‑1gp41重组蛋白。
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