[发明专利]一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法

摘要

一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤(1)取合柱金莲木种子作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS诱导培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS增殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；(5)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(6)取完整的带根苗进行炼苗后移植于苗床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量合柱金莲木的优质种苗，有效解决了合柱金莲木的规模化育苗问题。

主权项

一种合柱金莲木组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：选取合柱金莲木种子作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养20天，种子发芽后获得无菌试管苗，所述MS培养基中添加1.5mg/L灵发素LFS、0.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，所述MS繁殖培养基中添加1.0‑2.0mg/L灵发素LFS、0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.3‑0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，所述MS壮苗培养基中添加1.0mg/L灵发素LFS、1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为12‑14小时/天的条件下培养25天得到带根的完整植株，所述1/2MS生根培养基中添加0.1‑1.0mg/L灵发素LFS、0.5‑2.0mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1‑0.3mg/L的ABT 1号生根粉、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；(6)炼苗与移栽：步骤(5)获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2‑4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到细河沙：泥炭土＝1:2的苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田，移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3‑5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20‑25℃，相对湿度75‑90％，遮阳率为60‑80％。