[发明专利]石榴果皮中莽草酸和3-脱氢莽草酸的HPLC测定方法

摘要

本发明公开了一种石榴果皮中莽草酸和3-脱氢莽草酸的HPLC测定方法。本发明方法以甲醇-体积百分比1％磷酸水溶液为流动相，等度洗脱，可同时测定石榴果皮中莽草酸和3-脱氢莽草酸的含量，针对性地检测石榴果实中的莽草酸和3-脱氢莽草酸成分，本发明检测方法操作简单，洗脱时间短，检测全面，检测效率高，为揭示石榴果实中没食子酸的代谢机理奠定了理论基础。

主权项

石榴果皮中莽草酸和3‑脱氢莽草酸的HPLC测定方法，包括如下步骤：(1)石榴果实样品的前处理将石榴果实洗净擦干，把果皮削到液氮中冷冻5～10min，之后捞出至培养皿中，于‑20℃冰箱冷冻24～36h后，再放入冷冻干燥机中冷冻干燥36～48h；经冷冻干燥后的果皮粉碎后放入‑20℃冰箱中备用；(2)供试品溶液的制备称取步骤(1)处理好的果皮0.1g，置具塞锥形瓶中，加超纯水40mL，超声处理90～120min，过滤，定容至50mL，以0.22μm微孔滤膜过滤，放入‑20℃冰箱中保存，用于HPLC测定；(3)莽草酸和3‑脱氢莽草酸的含量测定高效液相色谱实验条件如下：安捷伦Zorbax XDB‑C18色谱柱，长×宽＝150mm×4.6mm，厚度为5μm，以甲醇为流动相A，体积百分比1％磷酸水溶液为流动相B，等度洗脱，流动相比例为：A：B＝5：95体积比，洗脱时间：10～15min，紫外检测器检测波长为200～260nm，流速为0.8～1ml/min，柱温为30℃，样品进样量10μl；莽草酸和3‑脱氢莽草酸含量测定方法如下：取莽草酸和3‑脱氢莽草酸标准品，分别配成每1ml含0.25mg、0.50mg、0.75mg、1.00mg、1.25mg、1.50mg、1.75mg、2.00mg的标准品溶液，二者混合后即为标准品混合液；高效液相色谱测定：在以上确定的色谱条件下，上述不同浓度的标准品混合液分别以10μl进样，测定莽草酸和3‑脱氢莽草酸标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准品峰面积为纵坐标，对应的标准品浓度为纵坐标做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对10个石榴品种供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到莽草酸和3‑脱氢莽草酸的峰面积，根据标准曲线计算供试品中二者的含量，即得。