[发明专利]丝胶蛋白包裹的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明涉及天然丝胶蛋白包裹的介孔硅纳米药物载体及其制备方法和在肿瘤治疗领域的应用，其制备方法包括制备纯丝胶蛋白固体；制备介孔硅纳米颗粒；制备具有规则孔道的氨基化、醛基化或双硫化介孔硅纳米颗粒；制备负载药物的氨基化、醛基化或者双硫化介孔硅纳米颗粒；制备pH/蛋白酶或还原/蛋白酶双响应性的丝胶/介孔硅复合型多功能控制体系。本发明操作简单，原料获得方式简便，成本低廉，普遍适用，无需特殊复杂设备等。使用该方法所制备的纳米复合体系，充分利用了外层丝胶蛋白和内层介孔硅纳米粒子的特性，具有pH/蛋白酶或者还原/蛋白酶双重响应性，具备抑制肿瘤细胞，实时监测纳米粒子定位和药物释放等多重功能，且载药量高，生物相容性好，在肿瘤诊疗领域特别是在解决肿瘤的多重耐药性方面具备广阔的应用前景。

主权项

丝胶蛋白包裹的具有pH/蛋白酶双重响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒的制备方法，其包括以下步骤：（1）称取蚕茧，用高温碱提法提取丝胶蛋白，溶解后的丝胶液再经过3500 Da的透析袋透析、冻干即得到纯丝胶蛋白固体；其中所述的高温碱提法是将剪碎后的蚕茧浸没在0.01‑0.05M的碳酸钠溶液中，100摄氏度溶解30‑60分钟；（2）利用溶胶凝胶及表面活性剂模板法制备介孔硅纳米颗粒；（3）将步骤（2）中所得介孔硅纳米颗粒分散于甲醇中，加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷，反应得到表面氨基化的介孔硅纳米颗粒；（4）将步骤（3）中的表面氨基化的介孔硅纳米颗粒置于甲醇和盐酸的混合液中回流洗脱模板，洗脱模板后离心即得到具有规则孔道的氨基化介孔硅纳米颗粒；（5）将步骤（4）中的具有规则孔道的氨基化介孔硅纳米颗粒分散于浓度为2.5wt%的戊二醛水溶液中，室温避光搅拌24小时，而后离心收集产物，然后用双蒸水清洗多次后，得到醛基化的介孔硅纳米颗粒；其中氨基化介孔硅纳米颗粒与戊二醛水溶液的质量体积比为100 mg : 10 mL；（6）将步骤（4）中所得的氨基化介孔硅纳米颗粒或步骤（5）中所得的醛基化介孔硅纳米颗粒与药物混合反应，得到负载药物的氨基化或者醛基化介孔硅纳米颗粒；（7）通过负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中表面的醛基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的氨基反应，或直接利用静电作用将丝胶蛋白包裹在氨基化介孔硅纳米颗粒表面，即得到丝胶蛋白包裹的具有pH/蛋白酶双重响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒；其中所述通过负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中表面的醛基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的氨基反应的具体步骤如下：将步骤（1）得到的纯丝胶蛋白固体加水制备成5 ‑ 10 mg/mL丝胶蛋白水溶液，将丝胶蛋白水溶液加入步骤（6）所得的负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中，避光35摄氏度搅拌6‑7小时；而后离心收集产物；然后用双蒸水冲洗产物，置于冷冻真空干燥机中冻干即获得粉末状的纳米颗粒，其中介孔硅纳米粒与纯丝胶蛋白的质量比为1 : 0.5 – 1 : 2。