[发明专利]富集T‑2毒素的免疫磁珠及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种富集T‑2毒素的免疫磁珠及其制备方法和应用，它是以羧基磁珠为载体，T‑2毒素单克隆抗体为识别中间体，经过活化‑偶联‑洗涤‑封闭的过程制备出偶联有T‑2毒素单克隆抗体的免疫磁珠，在合适的缓冲液中于一定条件下孵育可以高效捕捉、富集检测样本中的T‑2毒素。本发明富集T‑2毒素的免疫磁珠具有浓缩待测样品中T‑2毒素浓度、提高检测下限、排除杂质干扰、提高检测准确性和可靠性、减少样品处理时间达到快速检测的优点。

主权项

一种富集T‑2毒素的免疫磁珠的制备方法，其是以粒径2.8μm的羧基磁珠为载体，羧基磁珠末端具有反应活性的羧基基团，在经活化剂EDC‑NHS组合处理后，活化磁珠与T‑2毒素单克隆抗体进行偶联，制备成能够富集净化T‑2毒素的免疫磁珠，其特征在于：所述T‑2毒素单克隆抗体是用T‑2毒素人工抗原免疫白鼠所得到的，所述T‑2毒素人工抗原是T‑2毒素半抗原与载体蛋白的偶联物，所述T‑2毒素半抗原是按照如下方法制备得到的：Ⅰ、将100mg T‑2毒素加乙腈溶解，再加入200μL乙酸和200mg重铬酸吡啶盐，70℃反应4h，停止反应，旋蒸，除去乙腈，加水‑乙酸乙酯萃取，干燥，蒸干，上硅胶柱，用三氯甲烷/甲醇＝10:1洗脱分离，得到中间产物；Ⅱ、将中间产物加3mL乙醇溶解后，再加入50mg碳酸钾和5mL含有200mg氨基丙酸的水溶液，60℃反应12h，停止反应，加水‑乙酸乙酯萃取，除去有机相，水相加稀盐酸调节pH到4，加乙酸乙酯萃取，除去水相，有机相干燥蒸干，乙醚重结晶，得到T‑2毒素半抗原，其分子结构式为：