[发明专利]一种毛竹胚乳培养的方法

摘要

本发明公开了一种毛竹Phyllostachys edulis胚乳培养的方法，它是通过对毛竹未成熟胚乳进行适宜消毒后，首先在诱导培养基上形成愈伤组织，然后在增殖培养基上继代，继而在分化培养基上形成再生植株，最后经壮苗培养、炼苗后移栽成活。本发明解决了毛竹胚乳培养的技术难题，为实现毛竹的倍性育种提供了技术支撑，也为其他竹类植物的相关研究提供了有价值的参考。

主权项

一种毛竹Phyllostachys edulis胚乳培养的方法，其特征在于：由以下步骤组成：外植体的制备和消毒，外植体接种及愈伤组织诱导，愈伤组织的分化成苗，以及壮苗、炼苗和移栽过程，具体步骤如下：(1)外植体的制备和消毒：对开花毛竹进行人工授粉，于授粉后30‑40d取发育饱满的种子，放入存有冰袋的保温箱中冷藏，运至实验室，用4℃预冷的75％乙醇消毒1min；然后用4℃预冷的0.2％的次氯酸钠消毒20‑25min，期间不断振荡；最后用4℃预冷的无菌水冲洗5‑7遍，用无菌纸吸干表面水分，备用；(2)外植体接种及愈伤组织诱导：取消毒好的外植体，用镊子小心地剥去内外稃片，然后用镊子轻轻挤压种胚使胚乳挤出，将胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，于4℃冰箱中过夜，次日置于26℃暗培养10‑20d使胚乳上形成愈伤组织，每20‑30d将愈伤组织在相同培养基上继代一次；愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础，添加1‑5mg/L的2，4‑D、0.3‑1.0mg/L的ZT、500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺、300mg/L的水解酪蛋白、15g/L的葡萄糖、20g/L的蔗糖、10g/L的麦芽糖、8g/L的琼脂粉，灭菌前调整pH＝5.8；(3)愈伤组织的分化：将胚乳愈伤组织接种到分化培养基上，26℃光培养20‑30d，光照时间12h/d，光照强度1000‑1500lux，部分愈伤组织分化成苗，形成再生植株；分化培养基是以MS培养基为基础，添加0.5‑2.0mg/L的ZT、0.5‑2.0mg/L的IBA、0.5‑2.0mg/L的NAA、30g/L的麦芽糖、8g/L的琼脂：(4)壮苗、炼苗和移栽：将再生的小植株接种到壮苗培养基上培养30‑40d，开瓶炼苗5‑10d，取出小苗清洗根部的培养基，再用0.1％的高锰酸钾溶液清洗根部，然后将小苗栽植到灭菌的介质中，遮阴散射光培养一个月后，幼苗成活；壮苗培养基是以MS培养基为基础，添加1‑4mg/L的NAA、0.2‑0.5mg/L的TDZ、8g/L的琼脂、30g/L的蔗糖。