[发明专利]用于鉴别瘿椒树性别的引物及其应用

摘要

本发明公开了用于鉴别瘿椒树性别的引物及其应用，所述的引物包括TSMHF和TSMHR，具体序列为TSMHF5’‑TTGTCCCTCTCAACTTCGCT‑3’；TSMHR5’‑AAAATCAACCAGCCAGTTCG‑3’；所述的鉴定瘿椒树性别的引物用于鉴别瘿椒树的雄性及两性性别的应用。本发明从150对微卫星引物中偶然获得了1对用于鉴定瘿椒树性别的特异性微卫星标记引物，带型清晰、重复性好，能100％鉴别，可靠性强，可作为瘿椒树鉴定性别的引物；本方法筛选的瘿椒树性别鉴定的引物特异性极高，稳定性极强，只需要常规PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳、染色显影步骤，不需要进行片段分离，裸眼观察即可完成对瘿椒树性别的快速鉴定，为瘿椒树的定向育种提供理论和技术上的指导。

主权项

用于鉴别瘿椒树性别的引物用于鉴别瘿椒树的雄性及两性性别的应用，其特征在于，用于鉴别瘿椒树性别的引物，包括TSMHF和TSMHR，具体序列为：TSMHF：5’‑TTGTCCCTCTCAACTTCGCT‑3’；TSMHR：5’‑AAAATCAACCAGCCAGTTCG‑3’；采用PCR扩增方法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法利用引物TSMHF和引物TSMHR进行瘿椒树的雄性及两性性别的鉴别；所述的PCR扩增方法中的PCR扩增体系包括：PCR混合液7.5μL、TSMHF 0.5μL、TSMFR 0.5μL、DNA模版20ng及H2O 6.0μL，DNA模版为瘿椒树树叶的基因组DNA；所述的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法的电泳条件为电压300V、电流100mA及时间2.5h；在所述的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法后进行银染及显影，所述的银染的染色液为质量百分比为0.2％硝酸银溶液，染色时间为15min；所述的显影的显影液包括质量百分比为0.04％的碳酸钠、质量百分比为1.2％的氢氧化钠和体积百分比为0.4％的甲醛混合溶液，显影时间为10min。