[发明专利]一种具有益生元效应的莲子低聚糖单体的快速分离方法

摘要

本发明公开了一种具有益生元效应的莲子低聚糖单体的快速分离方法，属于植物活性成分的提取分离技术领域，其是以新鲜莲子为原料，经选料烘干、粉碎过筛、加水复配、水洗淀粉、恒温回流提取、抽滤、醇析、离心浓缩、冷冻干燥、MPLC分离、MPLC二次分离得聚合度相同或不同的莲子低聚糖单体粉末，经本发明分离得到的莲子低聚糖各单体的纯度可达95%以上。相比于高效液相色谱法和高速逆流色谱法，本发明采用MPLC进行分离，其制备量大，样品上样量可从毫克级到百克不等，分离时间较短，同时分离柱填料能够自主填充，增加了分离选择性；其工艺过程稳定、操作简便、分离效率得到极大提高，可用于高纯度、大量莲子低聚糖单体的分离制备。

主权项

一种具有益生元效应的莲子低聚糖单体的快速分离方法，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：1）选料烘干：选取颗粒饱满、无损伤的新鲜莲子，筛选去芯后于40~50℃下烘至水分含量为4~7%；2）粉碎过筛：将步骤1）干燥后的莲子粉碎，过40目筛；3）加水复配：取步骤2）所得莲子粉末，按料液比1:5加入去离子水混匀进行复配；4）水洗淀粉：将步骤3）所得复配料液过100目筛，并用莲子重量4~6倍的去离子水冲洗滤渣，合并滤液后置于4℃条件下静置沉淀8 h，离心去除沉淀，再将所得上清液与冲洗后的莲子滤渣合并：5）恒温回流提取：将步骤4）所得上清液和莲子滤渣于75~85 ℃下恒温回流提取1.5~2 h；6）抽滤：提取结束后将提取液真空抽滤，弃去滤渣；7）醇析：将步骤6）所得滤液于60~65℃下浓缩至原体积的1/5~1/4后加入浓缩液3~5倍体积、质量浓度为95%的乙醇，混匀后于4℃下静置10~12 h；8）离心浓缩：将步骤7）所得溶液离心后去除沉淀，上清液于55~65℃下浓缩至原体积的1/3~2/5；9）冷冻干燥：将步骤8）所得浓缩液经冷冻干燥，得莲子低聚糖粗糖粉末；10）MPLC分离：将步骤9）所得莲子低聚糖粗糖粉末溶于去离子水中，配制成浓度为0.1~0.2 g/mL的溶液，然后将溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤后注入MPLC进行分离，根据保留时间针对性地收集各目标化合物，收集液分别于55~65℃下真空旋转蒸发回收溶剂后，经冷冻干燥得含特定化合物的冻干粉末；11）MPLC二次分离：取步骤10）所得含特定化合物的冻干粉末，分别按步骤10）的操作和色谱条件进行二次进样，收集相同保留时间的各目标峰，经溶剂回收、冷冻干燥即得莲子低聚糖单体粉末；MPLC的分离系统包括中压特制玻璃柱，色谱泵、DAD紫外全波长扫描器和FLASH ELSD蒸发光散射检测器，自动馏分收集器和手动样品加载模块；所述中压特制玻璃柱为Claricep Flash HILIC亲水柱，其填料粒径为20‑35μm，孔径100A，比表面320 m2/g，碳含量5.0%；所述FLASH ELSD蒸发光散射检测器的检测条件为：吹扫氮气压力为2.5~3.5bar，漂移管温度85~95℃；MPLC分离中的上样体积为1 mL，流动相为乙腈与水的二元混合体系，其流速为30~45mL/min，柱温为25℃；流动相比例变化的具体程序为：流动相中乙腈比例为85~90%保持15~20min，随后将乙腈比例在30~35min内降至65~60%，保持50~60min，再将乙腈比例上升至85~90%，保持15~20min。