[发明专利]一种sll0659基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用有效
| 申请号： | 201510575861.7 | 申请日： | 2015-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN105087627B | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 陈高;何庆芳;杨连群;王兴军;范仲学;岳寿松;毕玉平;张燕;谢红艳;马德源 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种sll0659基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用。该应用所涉及的sll0659基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供了一种在集胞藻PCC6803β‑胡萝卜素合成中具有重要作用的集胞藻PCC6803中sll0659基因的应用，通过将集胞藻PCC6803中的sll0659基因敲除后，集胞藻PCC6803的叶黄素含量增加了22.3％，玉米黄素含量增加了31.3％，而海胆酮含量降低了34.3％，β‑胡萝卜素百分含量则降低了1.3％。同时，HPLC检测结果表明，与野生型集胞藻PCC6803相比，sll0659基因敲除突变体中类胡萝卜素组分中有一个明显的峰，经与标品对照检测，确定其为α‑胡萝卜素。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 sll0659 基因 合成 藻类 胡萝卜素 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种sll0659基因在提高集胞藻类胡萝卜素中叶黄素、玉米黄素和α‑胡萝卜素含量中的应用，所述sll0659基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，步骤如下：（1）根据GenBank数据库中公布的集胞藻PCC6803 sll0659序列扩增集胞藻PCC6803 sll0659上游cDNA片段，制得上游片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；（2）根据GenBank数据库中公布的集胞藻PCC6803 sll0659序列扩增集胞藻PCC6803 sll0659下游cDNA片段，制得下游片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；（3）将步骤（1）制得的上游片段连接入载体，用限制性内切酶BamHI 和SalI双酶切，回收载体片段1，将步骤（2）制得的下游片段用限制性内切酶BamHI 和SalI双酶切，制得回收片段2，连接载体片段1和片段2，制得sll0659BamHI载体；（4）用限制性内切酶BamHI酶切pBluescript‑Gm载体，回收庆大霉素抗性片段；将步骤（3）制得的sll0659BamHI载体用限制性内切酶BamHI酶切后，与庆大霉素抗性片段连接，制得集胞藻PCC6803 sll0659基因敲除的载体pKNsll0659‑Gm；（5）将步骤（4）制得的载体pKNsll0659‑Gm转化集胞藻PCC6803，经筛选，制得转基因集胞藻，经培养，即得。
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