[发明专利]一种深海耐盐、耐碱蛋白酯酶的表达和纯化、晶体结构及其应用

摘要

本发明本发明属于生物技术领域，具体为一种深海耐盐、耐碱蛋白酯酶的表达和纯化、晶体结构及其应用。本发明所述酯酶PE8含219个氨基酸，分子量为23.19kDa，来源于海洋细菌Pelagibacterium halotolerans B2T；酯酶PE8的晶结构由9个β折叠和8个α螺旋组成，其中，9个β折叠位于中心，8个α螺旋围绕在β折叠的周围；第118位丝氨酸、第169位天冬氨酸与第201位组氨酸构成催化三连体组成活性中心。酯酶PE8在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐、耐碱及手性选择性，能催化3‑(4‑氟苯基)戊二酸二甲酯生产药物中间体(R)‑3‑(4‑氟苯基)戊二酸单甲酯。该酯酶PE8的晶体结构在工业上应用于生产抗抑郁药物中间体、酶学底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种海洋细菌新型酯酶PE8晶体，为三维结构，其特征在于：所述酯酶PE8包含219个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO1所示，分子量为23.19kDa；晶体三维结构中，分辨率为1.66Å，酯酶PE8的晶体结构空间群为P21，一个不对称单位含两个蛋白分子；晶胞参数为：a＝41.772Å，b＝73.398 Å，c＝ 66.403 Å，α＝γ＝90°，β＝102.37°；所述晶体结构的原子坐标如表1所示。