[发明专利]长柱重楼抗癌活性部位PFE-PT3的化学成分分离和鉴定方法

摘要

提供长柱重楼[Parisforrestii(Takht.)H.Li]抗癌活性部位PFE‑PT3及其中的化学成分的提取和鉴定方法。采用色谱柱层析及半制备高效液相色谱的分离方法，以及质谱和核磁共振波谱的鉴定方法，从PFE‑PT3中分离、鉴定出了重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元‑3‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖基‑(1→4)‑[α‑L‑吡喃鼠李糖基‑(1→2)]‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷(PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、PariposideA和β‑蜕皮激素。本发明首次阐明PFE‑PT3的主要化学成分，通过提供的方法，可以简单、快速地从PFE‑PT3中获取上述化学成分，用于建立PFE‑PT3的质量控制标准。

主权项

1.一种长柱重楼正丁醇萃取部位PFE‑PT3的化学成分分离鉴定方法，其特征在于从长柱重楼正丁醇萃取部位PFE‑PT3分离得到重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷V、重楼皂苷H、偏诺皂苷元‑3‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖基‑(1→4)‑[α‑L‑吡喃鼠李糖基‑(1→2)]‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷(PGRR)、甲基原重楼皂苷I、甲基原重楼皂苷V、Pariposide A和β‑蜕皮激素，步骤为：(1)PFE‑PT3的制备：长柱重楼Paris forrestii(Takht.)H.Li干燥根茎，粉碎后用95％乙醇13L浸泡7天，过滤，滤渣继续提取，总共提取4次，合并滤液，回收溶剂，得浸膏，将PFE‑PT1用水2L制成混悬液，用乙酸乙酯2L×3萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位，乙酸乙酯萃取后的母液，继续用正丁醇2L×3萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PFE‑PT3；(2)PFE‑PT3经硅胶柱层析用10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿‑甲醇混合溶剂梯度洗脱划段，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C和Fr.D等4个部分；(3)取Fr.B部分经C18反相硅胶柱层析，10:90→100:0的甲醇‑水，得到Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3、Fr.B4、Fr.B5和Fr.B6等6个部分；(4)取Fr.B3部分，过LH‑20凝胶柱层析，甲醇洗脱后，再用硅胶柱层析5:1的氯仿‑甲醇洗脱得到β‑蜕皮激素；(5)取Fr.B4部分，用半制备高效液相色谱纯化得到甲基原重楼皂苷I，和甲基原重楼皂苷V；(6)取Fr.B5部分，用半制备高效液相色谱纯化得到Pariposide A、重楼皂苷II、重楼皂苷III、重楼皂苷I和重楼皂苷V；(7)取Fr.B6部分，半制备高效液相色谱纯化得到化合物PGRR和重楼皂苷H；其中，(5)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB‑C18色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为甲醇‑水，比例72:28，流速2mL/min；(6)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB‑C18色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为乙腈‑水，比例50:50，流速2mL/min；(7)所述的半制备高效液相色谱是用安捷伦1200液相色谱仪，Zorbax SB‑C18色谱柱，色谱柱大小9.4×250mm，洗脱剂为乙腈‑水，比例40:60，流速2mL/min。