[发明专利]一种鉴定马蹄莲软腐病抗性的离体叶盘接菌方法

摘要

本发明公开了一种鉴定马蹄莲软腐病抗性的离体叶盘接菌方法。本发明以包含叶主脉的叶圆盘为材料，通过内外部注射和浸泡胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种细菌悬液相结合的处理方法，可将鉴定马蹄莲软腐病抗性的时间缩短至60h，提高了鉴定效率，并且还提供了更加方便和容易掌握的抗性统计和分析方法。与之前方法相比，不但保证了植株不易受到伤害，鉴定成本低，操作步骤简单和易于控制等，而且还同样实现了评价结果可靠准确。这将会为今后马蹄莲育种过程中抗性品种的选择和培育提供非常必要的技术支持和帮助。

主权项

一种鉴定马蹄莲软腐病抗性的离体叶盘接菌方法，其特征在于，每个被鉴定品种或谱系随机挑选三份成熟健康的叶片，清洗消毒后首先在叶片中上部以主脉为中轴用打孔器获取直径为1.5cm的叶圆盘，重复取12次；之后利用注射器沿叶圆盘的主脉下部注射100μl胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种细菌悬液，并将其浸泡在包含10ml胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种细菌悬液的12孔培养板中；同时再将其放置在生化培养箱中28℃恒温培养，期间用无菌水补充1次，60小时后将鉴定材料取出，目测观察叶盘发病面积并根据分级标准进行分级；计算病情指数，最后依据计算的病情指数确定各品种或谱系的抗感特性变异情况。