[发明专利]一种黄藤组织培养快繁方法

摘要

一种黄藤组织培养快繁方法，包括如下步骤(1)取黄藤健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗获得健壮植株；(5)将健壮植株置于1/2MS生根培养基中进行生根培养获得完整带根苗。(6)将完整带根苗在室温下炼苗4‑7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到基质中，生长一个月后移栽到大田。采用本发明得到的黄藤丛生芽增殖系数达到30‑40倍，生根率在95％以上，移栽成活率在95％以上，有效解决黄藤的规模化育苗问题。

主权项

一种黄藤Fibaurea recisa Pierre组织培养快繁方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：取黄藤健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，去除叶片，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1%升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；（2）外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤（1）得到的外植体置于超净工作台内，切成带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中，MS诱导培养基中添加了0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（3）试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2）中得到的无菌试管苗置于MS丛生芽培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养30天，得到试管苗丛生芽，其中，MS丛生芽培养基中添加了0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1‑0.5mg/L的激动素KT、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加了0.1‑0.5mg/L吲哚乙酸IAA、0.5‑0.1.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（5）生根培养：将步骤（4）中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中，1/2MS生根培养基中添加了0.5‑1.0mg/L的萘乙酸NAA、30g/L的香蕉泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（6）炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温下炼苗4‑7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土=1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。