[发明专利]一种利用油菜CMS系根组织提取线粒体DNA的方法

摘要

一种利用油菜CMS系根组织提取线粒体DNA的方法，以油菜CMS系的苗期至蕾苔期的幼嫩根部组织为材料，通过对根部组织进行前处理和预处理，然后对油菜根部组织进行匀浆和过滤，接着采用差速离心法提取线粒体，再结合蔗糖衬垫法纯化线粒体，最后采用裂解法进一步提取mtDNA。本发明提取的mtDNA含量高，纯度高，质量好；操作简单，减轻了工作量，节约了时间，降低了实验成本，提高了提取效率。本发明不仅适用于油菜CMS系mtDNA的提取，也适用于油菜其它不育系mtDNA的提取，以及适用于除油菜不育系之外的一般油菜材料mtDNA的提取，具有广泛的应用前景。

主权项

一种利用油菜CMS系根组织提取线粒体DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)油菜根部组织的前处理和预处理：以油菜CMS系的幼嫩根部组织为材料，先清除根部表面附着的土壤颗粒和杂质，用自来水冲洗干净根部，再用蒸馏水漂洗1～3次，然后室温下，将根部进行黑暗预处理48～72h；(2)油菜根部组织的匀浆和过滤：将处理后的幼根剪成1～2cm的小段，放入预冷的匀浆杯中，然后加入5mL/g FW预冷的提取缓冲液A，匀浆至根细碎；接着将匀浆液用2～4层灭菌纱布过滤，再用1～3层180～230目滤网过滤；(3)油菜根部组织线粒体的提取与纯化：先采用差速离心法粗提线粒体，然后采用蔗糖衬垫法纯化线粒体，最后采用裂解法提取线粒体DNA。