[发明专利]一种GFP多克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201510607983.X | 申请日： | 2015-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN105273082A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 肖建伟;李瑞丽;苏泊丹;林金星 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 姜彦 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种GFP蛋白多克隆抗体的制备方法，首先用DNAstar软件对GFP蛋白进行抗原预测分析，选择亲水性强，抗原性指数高的两段区域作为抗原区，然后通过设计引物，用含有GFP核苷酸序列的pCAMBIA1300质粒做模板，进行扩增；把抗原基因片段连接到pET28a载体上，重组质粒转化入BL21中，筛选阳性克隆并PCR鉴定；选用日本大耳白兔，在注射抗原的同时，加入免疫佐剂刺激机体产生较强的免疫反应，对多克隆抗体兔进行双肩皮下两点和双后腿肌肉两点常规免疫；纯化IgG抗体。本发明所制备的抗体具有效价高，灵敏性好，可重复等优点，可以有效弥补现有GFP抗体的缺点和不足；可以有效降低抗体的非特异性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gfp 克隆 抗体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述多克隆抗体的制备方法包括以下步骤：首先用DNAstar软件对GFP蛋白进行抗原预测分析，选择亲水性强，抗原性指数高的两段区域作为抗原区，然后通过设计引物，用含有GFP核苷酸序列的pCAMBIA1300质粒做模板，进行扩增；把抗原基因片段连接到pET28a载体上，重组质粒转化入BL21中，筛选阳性克隆并PCR鉴定；选用日本大耳白兔，一组二只，在注射抗原的同时，加入免疫佐剂刺激机体产生较强的免疫反应，对多克隆抗体兔进行双肩皮下两点和双后腿肌肉两点常规免疫；采用A蛋白或G蛋白纯化IgG抗体。
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