[发明专利]一种治疗再生障碍性贫血的干细胞制剂及其制备方法

摘要

本发明提供了一种治疗再生障碍性贫血的干细胞制剂的制备方法，弥补现有技术的不足，降低移植抗宿主病的发生率，在较短时间内获得更多的具有较强免疫抑制功能的间充质干细胞，满足临床需求，为干细胞的移植功效提供了新的思路，发挥重要的实际应用价值。本发明还提供了一种用于治疗再生障碍性贫血的干细胞制备方法，该方法用特殊方法诱导和培养间充质干细胞，可以有效地提高和增强间充质干细胞免疫抑制能力，可进一步制备成治疗再生障碍性贫血的干细胞制剂。

主权项

一种治疗再生障碍性贫血的干细胞制剂，其特征在于，是由特定方法制备的干细胞、人血白蛋白，低分子肝素钙，复方氨基酸，维生素C，无酚红的DMEM/F12培养基、白介素3（IL‑3），重组人粒细胞集落刺激因子（G‑CSF），白介素11（IL‑11），促红细胞生成素（EPO），干细胞因子(SCF)及人促血液血管生长素(HAPO)，按一定比例配制而成；其中，所述的特定方法制备的干细胞的具体制备步骤如下：（1）取P3~P6代的间充质干细胞，首先进行流式细胞鉴定，标记物CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达在90%以上；不表达CD34、CD45，在5%以下；（2）将上述步骤（1）中鉴定后的干细胞以2×10⁴个/ml的浓度混匀于培养基A中，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中贴壁培养，培养第2天换液，以后每2天换液1次；（3）当上述步骤（2）中细胞培养融合至80%‑90%时，以0.025%胰蛋白酶‑EDTA在37℃条件下消化3~4分钟，制备成细胞悬液，以2×10⁴个/ml的浓度混匀于培养基B中，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中贴壁培养，培养第2天换液，以后每2天换液1次；（4）当上述步骤（3）中细胞培养融合至80%‑90%时，以0.025%胰蛋白酶‑EDTA在37℃条件下消化3~4分钟，制备成细胞悬液，以5×10⁵个/ml的浓度混匀于培养基C中，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中贴壁培养48~72h，培养第2天换液；（5）将上述步骤（4）特殊培养后的干细胞，以0.025%胰蛋白酶‑EDTA在37℃条件下消化3~4分钟，制备成细胞悬液，以1000r/min离心10分钟，弃去上清液并以生理盐水重悬，以1000r/min离心10分钟后弃去上清液，收集沉淀的干细胞备用。