[发明专利]光滑爪蟾皮肤抗菌肽及其制备方法与用途

摘要

一种光滑爪蟾抗菌肽及其制备方法和用途，该抗菌肽分离自光滑爪蟾皮肤分泌物，经纯化测序后得到其序列为Asp‑Glu‑Asp‑ Asp‑ Asp（DEDDD），质谱检测其分子量为607.7Da。本发明采用物理方法对光滑爪蟾的皮肤进行刺激，极大程度地保护了抗菌肽的结构完整性以及生物学活性。该抗菌肽具有显著的抑菌活性、较低的溶血活性以及良好的抗乳腺癌活性。其分子量较低，降低了其化学合成的难度，大大减小了成本。其对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均有显著的抑菌作用，并且在MIC值范围内溶血活性极低，并且还有较高的抗乳腺癌活性，可用于伤口创伤感染的预防、抗肿瘤、抑菌制剂等多种医疗方向，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种光滑爪蟾皮肤抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、提取光滑爪蟾皮肤分泌物：由物理刺激光滑爪蟾皮肤诱导皮肤分泌出分泌物，用超纯水收集上述分泌物后，离心去除沉淀取上清，上清经过滤后，再次离心，制得粗提物，用金黄色葡萄球菌S.aureusATCC29213检测粗提物的抗菌活性，利用冻干机对粗提物进行浓缩后冷冻保存；步骤A中光滑爪蟾皮肤分泌物由物理刺激光滑爪蟾皮肤后得到，物理刺激为恒压电刺激，电压为15‑20V；离心时的转速为12000rpm；B、制备型高效液相色谱分离纯化；并按照下表内容设置洗脱程序：C、制备液相分离峰的活性检测；其中测试菌为金黄色葡萄球菌，采用方法为抑菌圈活性检测；D、分析型高效液相色谱分离纯化；并按照下表内容设置洗脱程序；时间（min）流速（mL/min）比例（%B）0.01105.001020.001560.0014070.00170E、分析液相分离峰的活性检测及质谱鉴定，活性检测方法与步骤C中的检测方法相同；制备的光滑爪蟾皮肤抗菌肽是包括4分子天冬氨酸和1分子谷氨酸的序列为Asp‑Glu‑Asp‑Asp‑Asp即DEDDD的5肽。