[发明专利]一种提取动物组织核酸的方法有效

专利信息
申请号: 201510610875.8 申请日: 2015-09-23
公开(公告)号: CN105087552B 公开(公告)日: 2018-08-17
发明(设计)人: 贾松涛;赵林萍;李梦雨;董瑞静;赵市勇;张娟;张丹鹤 申请(专利权)人: 河南中标检测服务有限公司;漯河中标检测服务有限公司;郑州中道生物技术有限公司;郑州大学
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10
代理公司: 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙) 11512 代理人: 张群峰;吕良
地址: 450001 河南省郑州高新技*** 国省代码: 河南;41
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摘要: 一种提取动物组织核酸的方法,包括以下步骤:(1)将动物组织样品、核酸提取液加入到鼓泡床容器中,所述核酸提取液含有能够吸附核酸的磁性微球;所述鼓泡床容器底部设置有微孔板和气体入口;(2)从所述气体入口向鼓泡床容器中通入氮气或惰性气体,使动物组织样品与核酸提取液充分混合、反应,分离出的核酸被磁性微球吸附。根据本发明的提取动物组织核酸的方法,能够对动物组织进行快速解离并高效分离提纯核酸,能够广泛应用到动物疫病检测领域。
搜索关键词: 一种 提取 动物 组织 核酸 方法
【主权项】:
1.一种提取动物组织核酸的方法,包括以下步骤:(1)将动物组织样品、核酸提取液加入到鼓泡床容器中,所述核酸提取液含有能够吸附核酸的磁性微球;所述鼓泡床容器底部设置有微孔板和气体入口;所述鼓泡床容器为直径为15‑30mm的圆柱形容器;其中微孔板的孔径为3‑10μm;其中,所述核酸提取液含有磁性微球、异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸,其中异硫氰酸酯的浓度为3.5‑5M,盐酸胍的浓度为1.5‑3M,碘化钠的浓度为1.2‑2.5M,EDTA的浓度为15‑30mM,十二烷基氨基酸的浓度为60‑100mM;磁性微球的质量浓度为10‑15%;磁性微球由纳米级磁芯和多孔碳化硅包覆层组成;磁性微球的粒径在10‑50μm之间;其中磁性微球通过以下方法制得:(a)将聚碳硅烷固体溶解到有机苯类溶剂中,形成乳液;将纳米级磁性粉体加入到含有表面活性剂的有机醇类溶剂中,搅拌均匀形成悬浮液;将悬浮液加入到乳液中,搅拌均匀,得到混合液;其中聚碳硅烷与磁性粉体的质量比为2‑5:1;(b)将混合液通过微孔膜滴入到含有交联剂的温水溶液中,水温保持在60‑80℃;使得混合液中聚碳硅烷交联固化在磁性粉体表面;利用减压蒸馏手段将水分和有机溶剂去除,得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球;(c)将固体微球在500‑1000℃下、氮气或惰性气体保护下进行保温1‑2小时,其中升温速率为0.1‑2℃/min,从而形成表面多孔的碳化硅包覆纳米磁芯的固体微球;(d)采用磁分离手段,对热处理后的磁性微球进行筛选,去除没有磁性或磁性不够要求的不合格磁性微球,最终得到符合磁性要求的合格磁性微球成品;(e)磁性微球的活化:将上述步骤中制得的成品磁性微球、催化剂和氨基试剂以1:1‑20:5‑30的质量比混合,保持pH值为10‑13,温度为50‑80℃下,搅拌反应5‑10小时,冷却,经磁性分离、洗涤,得到表面带有亲和基团的磁性微球;其中催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾,氨基试剂选自氨基苯甲脒或氨基苯基硼酸;(2)从所述气体入口向鼓泡床容器中通入氮气或惰性气体,气体流速为10‑100mL/min;使动物组织样品与核酸提取液充分混合、反应,分离出的核酸被磁性微球吸附。
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