[发明专利]一种动物组织核酸提取液的制备方法

摘要

一种动物组织核酸提取液的制备方法，该方法包括磁性微球的制备和表面活化以及最终提取液的配置。其中磁性微球先通过聚碳硅烷包覆纳米级磁性粉体，再通过热处理和磁选手段制得。根据本发明的制备方法所制得的提取液，能够对动物组织进行快速解离并高效分离提纯DNA，能够广泛应用到动物疫病检测领域。

主权项

一种动物组织核酸提取液的制备方法，包括以下步骤：(一)磁性微球的制备(1)将聚碳硅烷固体溶解到有机苯类溶剂中，形成乳液；将纳米级磁性粉体加入到含有表面活性剂的有机醇类溶剂中，搅拌均匀形成悬浮液；将悬浮液加入到乳液中，搅拌均匀，得到混合液；其中聚碳硅烷与磁性粉体的质量比为2‑5:1；(2)将混合液通过微孔膜滴入到含有交联剂的温水溶液中，水温保持在60‑80℃；使得混合液中聚碳硅烷交联固化在磁性粉体表面；利用减压蒸馏手段将水分和有机溶剂去除，得到聚碳硅烷包覆磁性粉体的固体微球；其中交联剂选自N,N‑亚甲基双丙烯酰胺或氨丙啶，交联剂与水的质量比为0.05‑0.2:1；(3)将固体微球在500‑1000℃下、氮气或惰性气体保护下进行保温1‑2小时，其中升温速率为0.1‑2℃/min，聚碳硅烷裂解后形成表面多孔的固体微球；(4)将热处理后的固体微球通过磁分离手段进行筛选，筛选出合格的成品磁性微球；(二)磁性微球的活化将(一)中制得的成品磁性微球与催化剂、氨基试剂以1:1‑20：5‑30的质量比混合，保持pH值为10‑13，温度为50‑80℃下，搅拌反应5‑10小时，冷却，经磁性分离、洗涤，得到表面带有亲和基团的磁性微球；其中催化剂选自氢氧化钠或氢氧化钾，氨基试剂选自氨基苯甲脒或氨基苯基硼酸；(三)提取液的配制将步骤(二)中活化后的磁性微球与异硫氰酸酯、盐酸胍、碘化钠、EDTA、十二烷基氨基酸配置成提取液，其中异硫氰酸酯的浓度为3.5‑5M,盐酸胍的浓度为1.5‑3M,碘化钠的浓度为1.2‑2.5M,EDTA的浓度为15‑30mM,十二烷基氨基酸的浓度为60‑100mM；磁性微球的质量浓度为10‑15％。