[发明专利]一种改造枯草芽孢杆菌菌株的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种改造枯草芽孢杆菌菌株的方法。该方法包括人工构建不含产孢致死因子基因的基因序列、电击转化、筛选验证等步骤。现有技术中，对于产孢致死因子基因（skf）虽然已有部分基础研究，但通过敲除产孢致死因子基因是否可以提高内源酶产量则是未知数，同时对于不同微生物菌株，敲除产孢致死因子基因后对于菌株发酵能力的改进是否相同更是缺乏研究。本发明以具体的枯草芽孢杆菌菌株为例，成功构建了缺失产孢致死因子基因（skf）的新菌株，在将该菌株具体用于发酵生产淀粉酶时，测定结果表明，所构建的新菌株的酶活得到了较好提升，显现出了较好地应用前景。

主权项

一种改造枯草芽孢杆菌菌株的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）人工构建不含产孢致死因子基因的基因序列，所述不含产孢致死因子基因的基因序列，由3部分DNA片段组成，分别是：skf基因上游部分序列片段A，序列如SEQ ID NO.1所示；四环素抗性基因表达序列片段B ，序列如SEQ ID NO.3所示；skf基因下游部分序列片段C，序列如SEQ ID NO.2所示； （2）电击转化，将步骤（1）中所构建不含产孢致死因子基因的基因序列电击转化枯草芽孢杆菌感受态细胞，获得转化子；（3）筛选验证，对步骤（2）所构建的枯草芽孢杆菌菌株，筛选、验证获得不含产孢致死因子基因正确转化菌株。