[发明专利]一种蜈蚣兰组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种蜈蚣兰组培快繁方法，属于植物组织培养研究领域。本方法包括如下步骤外植体采集及消毒、芽诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽。通过筛选出各培养阶段的培养基配方和培养条件，使用多菌灵抑制内生菌污染，采用合理的炼苗措施，从而建立蜈蚣兰组织培养快速繁殖技术体系，实现了蜈蚣兰的组织培养和快速稳定繁殖，采用本方法重复性良好，得到的再生植株植物学性状稳定，有效增殖率高，生根苗生长健壮、整齐，生根率为85%～90%，移栽成活率为94%～98%，可进行大规模商品化育苗生产，对于保护蜈蚣兰种质资源及其开发利用具有重要意义。

主权项

一种蜈蚣兰组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体采集及消毒：春季剪取长2～3cm带茎尖的蜈蚣兰茎段，剥去叶片，用清水冲洗1～2h，在超净工作台上用75％乙醇溶液消毒40S，用0.1％升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5～6次；(2)芽诱导培养：将经步骤(1)消毒后的茎段切下茎尖，接种至芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，培养25～35d得到丛生芽，培养条件为：光照10～12h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；所述的芽诱导培养基成分为：MS+6‑BA3.0～5.0mg/L+IAA0.5～0.8mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC 1.0～1.5g/L+50％多菌灵1～1.5g/L+CM 10％，pH为5.5～6.5；(3)增殖培养：将步骤(2)芽诱导培养得到的丛生芽切取单芽，接种至增殖培养基进行增殖培养，培养30～40d后切取生长健壮的单芽，备用，培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；所述的增殖培养基成分为MS+6‑BA4.0～6.0mg/L+NAA0.6～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50％多菌灵1～1.5g/L+CM10％，pH5.5～6.5；(4)壮苗培养：将步骤(3)增殖培养中获得的单芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养，培养15～20d后得到无根苗，培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；所述的壮苗培养基成分为MS+ GA31.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50％多菌灵1～1.5g/L+椰汁15％，pH5.5～6.5；(5)生根培养：将步骤(4)壮苗培养中获得的无根苗接种至生根培养基进行生根培养，培养25～35d得到生根的试管苗，培养条件为：光照10～12h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；所述的生根培养基成分为：MS+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+50％多菌灵1～1.5g/L+香蕉泥10％，pH5.5～6.5；(6)炼苗移栽：将步骤(5)生根培养得到的试管苗，挑选苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度25±2℃、空气相对湿度75～80％、光强2000～2500Lx的环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后取出组培苗，洗净培养基，栽至温度16～26℃，空气相对湿度80％～85％，光强2000～2500Lx环境下的苗床中，苗床基质由泥炭土、珍珠岩、松树皮按体积比3：1：1混合而成。